Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Филдс Б.Н. -> "Вирусология: В 3-х т. Том 1 " -> 162

Вирусология: В 3-х т. Том 1 - Филдс Б.Н.

Филдс Б.Н., Найп Д.М., Мэрфи Ф.А., Харрисон С. Вирусология: В 3-х т. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 492 c.
ISBN 5-03-000283-9
Скачать (прямая ссылка): virusologiyat11989.djvu
Предыдущая << 1 .. 156 157 158 159 160 161 < 162 > 163 164 165 166 167 168 .. 224 >> Следующая

Клеточные линии, полученные после трансфекции первичных клеток грызунов фрагментами ДНК Ру, кодирующими большой Т-антиген, удавалось трансформировать плазмидой, кодирующей средний Т-антиген. Эти трансформанты делились до такой же высокой плотности насыщения и проявляли столь же высокую эффективность образования клонов в полужидком агаре, что и клетки, трансформированные вирусом дикого, типа. Любопытно, однако, что одновременная трансфекция плазмидами, несущими гены большого и среднего Т-антигенов, не приводила к трансфор-
мации первичных клеток: нужна была трансфекция еще и телом малого Т-антигена [228]. Функция, с помощью которой малый Т-антиген осуществляет согласование трансформации первичных клеток большим и средним Т-антигенами, неизвестна.
Работы по изучению онкогенности плазмид, кодирующих индивидуальные Т-антигены Ру, показали, что один средний Т-ан-тиген не может индуцировать опухоли у новорожденных крысят [7]. Удивительно, что введение рекомбинантной плазмиды, содержащей функциональный средний Т-антиген, вместе с другой плазмидой, содержащей гены либо большого Т-антигена, либо малого, приводит к развитию у них опухолей. Объяснить эту кажущуюся эквивалентность малого и большого Т-антигенов в процессе индукции опухолей пока не удается.
Описанные выше исследования предполагают, что в процессе перерождения первичной клетки в полностью трансформированную происходит множество последовательных изменений в регуляции клеточного роста. Некоторые из них могут индуцироваться экспрессией индивидуальных Т-антигенов, тогда как другие в культивируемых клетках происходят спонтанно. Например, экспрессия большого Т-антигена может привести к иммортализации клеток (т. е. к их неограниченному делению) и к появлению у них способности расти в обедненной сывороткой среде, что невозможно в случае нетрансформированных клеток или клеток, трансформированных средним Т-антигеном Ру. Если длительное время поддерживать первичные клетки in vitro, могут спонтанно образоваться иммортализованные клеточные линии; следовательно, функция иммортализации, которую выполняет большой Т-антиген, может возникнуть случайно, чего нельзя сказать о функции «независимости от высокого содержания сыворотки». Средний Т-антиген индуцирует полностью трансформированный фенотип, но только у иммортализованных (случайно или с помощью большого Т-антигена) клеток. Как мы уже говорили, функция, которую выполняет малый Т-антиген при согласованной трансформации клетки всеми тремя Т-антигенами, неясна, однако ее вполне заменяет какое-то изменение в клетке, которое происходит после ее иммортализации бол'ыним Т-антигеном. Способность как малого, так и большого Т-антигенов дополнять средний Т-антиген при индукции опухолей показывает, что функции Т-антигенов в процессе трансформации клетки не эквивалентны тем функциям, которые они выполняют при индукции опухоли.
Биохимические функции среднего Т-антигенэ полиомавируса
Работы по изучению механизма действия Т-антигенов Ру при индукции трансформации клетки только начинаются. Как и в
случае SV40, при трансформации клетки Ру изменяются многие ее биологические и биохимические свойства. Из-за плейотроп-ной активности Т-антигенов несомненно происходит также множество вторичных событий. Изучение механизма действия Т-ан-тигенов сдерживается отсутствием чистых препаратов Т-анти- i генов Ру. Выделение и очистка Т-антигенов Ру затруднены тем, I что в инфицированных и трансформированных клетках эти бел- I ки представлены в незначительном количестве и довольно часто связаны с нерастворимыми клеточными структурами. Роль среднего Т-антигена Ру в трансформации клетки можно объяснить двумя его свойствами, о которых говорилось выше, — локализацией в мембранных структурах и сопутствующей протеинки-назной активностью.
Согласно имеющимся данным, средний Т-антиген Ру распределен по разным областям клетки. При биохимическом фракционировании его обнаруживают как в плазматической мембране, так и в ядерной фракции [259]. Иммунофлуоресцентная микроскопия свидетельствует о локализации среднего Т-антигена в ядерной мембране, а иммуноэлектронная микроскопия — о его связи главным образом с мембранными структурами цитоплазмы [109]. Тем не менее считается, что функциональный средний Т-антиген локализован в плазматической мембране. Это очень важно, поскольку по современным представлениям плазматической мембране принадлежит главная роль в регуляции клеточного роста; кроме того, это интересно из-за аналогии с трансформирующим белком p60src вируса саркомы Рауса, который также находится на внутренней поверхности плазматической мембраны (более подробно см. в работе [13]).
Средний Т-антиген содержит около 30% гидрофобных аминокислот, что согласуется с его локализацией в мембране. Однако N-концевая аминокислотная последовательность среднего Т-ан-тигена отличается от N-концевой сигнальной последовательности тех белков, которые ориентированы к наружной поверхности плазматической мембраны [266]. На С-конце среднего Т-антигена располагается участок из 20 гидрофобных остатков, сходный с трансмембранными участками белков, «заякоривающими» их в плазматической мембране. Исследования делеционных [205] и точечных [29] мутантов подтверждают представление о том, что> для трансформации клетки, индуцируемой средним Т-антигеном* С-концевая гидрофобная область существенна и что эта С-кон-цевая область связывается с плазматической мембраной [29].
Предыдущая << 1 .. 156 157 158 159 160 161 < 162 > 163 164 165 166 167 168 .. 224 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed