Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Выращивание гетерологических опухолей на ХАО является обычно низкочувствительным методом тестирования туморогенности. Частота выхода ниже, чем при большинстве других методов, так как вследствие быстрого развития куриных эмбрионов данная техника пригодна лишь для кратковременных исследований в течение нескольких дней (Moore, 1958; Giovanella, Fogh, 1978).
Эмбриональные и новорожденные животные интенсивно использовались в исследованиях по опухолевой трансплантации (Gallagher, Korson, 1959; Kutner, Southam, 1960; Ebbesson et al., 1977).
Хотя частота выхода опухолей значительно варьировала в зависимости от типа донорской ткани, у эмбриональных и новорожденных хозяев она составляла или превышала таковую при использовании любых иммуиологически привилегированных мест. Трансплантация тестируемых тканей новорожденным животным является простым и быстрым методом, но еще лучшие результаты могут быть достигнуты при использовании иммуносупрессироваиных новорожденных хозяев (Forsberg, Nordqvist, 1969; Adams et al., 1970; Gallimore etal.. 1977).
Безволосые мыши утрачивают тимус и становятся дефицитными по Т-клеточному иммунитету, хотя они обладают значительной активностью естественных киллеров. Большое преимущество безволосых мышей для пробы на туморогенность — толерантность к широкому спектру нормальных и опухолевых ксенотрансплантатов млекопитающих (см. обзор Giovanella, Fogh, 1978). Их недостатки — восприимчивость к патогенной инфекции и высокая стоимость. Так же, как и у новорожденных реципиентов, частота выхода у безволосых мышей значительно зависит от типа трансплантируемой ткани. При изучении 388 человеческих опухолей Sharkey и соавт. (1978) сообщили об успешной трансплантации почти в 90 % случаев и о прогрессивном росте в 31 % случаев. Только 12 % трансплантатов отторгались
2*
19
без каких-либо признаков роста. Прогрессивный рост был наивысшим для рецидивирующих (54 %) и метастазирующих опухолей (49 %), а наименьшим — для первичных опухолевых трансплантатов (27 %). Из опухолей, растущих в первичных трансплантатах, наиболее высоким был выход опухолей легких (41 %) и костей (31 %), в то время как опухолей грудной железы составлял только 8 % (Fogh et al.,
1979).
2.2.4, Иммуносупрессированные хозяева
Животные могут быть иммунологически супрессированы с помощью некоторых средств, включая облучение всего организма, лечение кортикостероидами, антилимфоцитарную сыворотку (AJIC) и тимэктомито (Toolan, 1951; Toolan, 1953; Moore, 1958; James, 1967). Все четыре метода увеличивают выход опухолей, особенно при использовании во взаимодействии с иммунодефектными реципиентами. Кортизон и рентгенооблучепие могут увеличить частоту прогрессивного роста в защечном мешке хомяка гетеротрансплантатов человеческой опухоли в 5 раз (Handler, 1956). Обработка хозяев AJIC дает равное или большее увеличение выхода опухолевых гетеротрансплантатов в защечном мешке как у новорожденных, так и взрослых реципиентов и у безволосых мышей (Forsberg, Nordqvist, 1969; Lewis et al., 1969; Adams et al., 1970; Giovanella et al., 1976; Owen, 1976).
В нескольких случаях обработка AJIC вызвала выход опухолей у 75 % животных, причем эти опухоли вовсе не прививались у нелеченых хозяев (Forsberg, Nordqvist, 1969; Lewis, 1969). В общем выход опухолей у хозяев, обработанных AJIG, приблизительно соответствует таковому у нелеченых безволосых мышей (Chew et al., 1976; Gallimore et al., 1977). Тимэктомия новорожденных хозяев вызывает увеличение прививаемости опухолей, которое сравнимо с результатами, полученными при обработке животных AJIC (Osoba, Auer-sperg, 1966). У отъемышей тимэктомия также увеличивает выход опухолей, но не в такой степени, как у новорожденных (Cook et al., 1969). В настоящее время наиболее успешным методом опухолевой трансплантации является использование тимэктомированных при рождении хозяев, летально облученных на фоне пересадки костного мозга от сингенных животных и обработанных AJTC. Этот метод постоянно вызывает выход опухолей приблизительно в 60—80?^ случаев и прогрессивный рост в 35—65 % случаев (Castro, 1972; Cobb, 1973; Berenbaum et al., 1974; Pickard et al., 1975).
2.2.5. Приготовление клеток и путь инокуляции
Хотя иммунное отторжение является, вероятно, единственной наиболее важной причиной несостоятельности многих истинно опухолевых тканей индуцирование опухоли in vivo и выход новообразований также зависят от способа приготовления тестируемых клеток и пути их инокуляции животным. Культивируемые клетки обычно трансплантируются хозяевам-реципиентам в виде клеточных сус-
20
пензий, Приготовленных с помощью диссоциации протеазами или этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТК). Оба агента высоко токсичны и вызывают очевидный лизис одних клеток и в то же время ухудшение жизнеспособности других (Owens, 1953; Skehan, Friedman, 1975; McKeehan, 1977; Smets, 1979). Обработка неопластических тканей химическими и энзиматическими диссоциирующими агентами может на порядок уменьшить выход опухолей (Cobb, 1973; Rein, Shin, 1978; Smets et al., 1979) и подействовать таким же образом на частоту появления метастазов (Grossi et al., 1960; Agostino, Clifton, 1962). Токсичность трипсина рассматривается как важная причина трудности получения нормальной клеточной линии с бесконечной продолжительностью жизни (Sanford, Hoemann, 1967). Хотя перевиваемые линии обычно приобретают некоторую степень устойчивости к токсичности диссоциируемых агентов, при пассировании они частично утрачивают эту устойчивость (McKeehan, 1977; Smets et al., 1979). Результаты исследований, проведенных в нашей лаборатории, показали, что лизис, вызываемый трипсином или диссоциацией ЭДТК, составляет 10—20 % для стационарных линий и 40— 80 % для культур на ранних пассажах. Таким образом, индуцированные диссоциацией лизис и смертность клеток должны рассматриваться как серьезные источники артефактов в пробах на туморо-генность.
