Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Особая проблема возникает с тканями, зависимыми от субстрата, так как, пока они не прикрепятся либо к твердому субстрату, либо к другим клеткам в пределах многоклеточного агрегата, для них характерна высокая смертность. При введении суспензии единичных клеток субстратнозависимые клетки обычно погибают, и, следовательно, нельзя ожидать, что они вызовут опухоли с какой-либо частотой выхода, даже если они являются высоко злокачественными. Та же линия может характеризоваться высокой частотой выхода и прогрессивным ростом при условии имплантации либо в виде многоклеточных агрегатов, либо прикрепленной к соответствующему твердому субстрату. Наоборот, рост in vivo прикрепленной клеточной популяции не обязательно отражает туморогенность. Это позволяет аргументировать, что прикрепление представляет собой патологическую ситуацию, которая дает возможность совершенно нормальной клеточной линии расти при соответствующих условиях, в то время как обычно она не способна к этому. В качестве альтернативы можно предполагать, что прикрепление к искусственному субстрату ускоряет спонтанную трансформацию и что прогрессивный рост — результат пролиферации клеточных клонов, выделенных из предшественников, подвергшихся трансформации вслед за имплантацией. Таким образом, прогрессивный рост in vivo при имплантации субстратнозависимой линии, прикрепленной к твердому субстрату, может отражать нормальный статус, первичную туморогенность или индуцированную в течение пробы на онкогенность трансформацию. Достоверных методов для определения различий этих альтернатив до настоящего времени не существует.
Установлены две стационарные линии, наиболее часто используемые в качестве нормальных контролей в пробах на туморогенность,
это — клетки ЗТЗ и СЗН/ЮТу-/С18. Обе не вызывают опухоли при инокуляции в виде суспензии единичных клеток, но формируют быстро и прогрессивно растущие злокачественные опухоли при имплантации прикрепленными к твердым субстратам (Boone et alM
1976, 1979). Большинство исследователей пренебрегали этими фактами и продолжают предполагать, что обе клеточные линии — нормальные, хотя нет экспериментальных доказательств подобного предположения. Эти линии являются основой для многих предположений
о наличии различных коррелятов туморогенности, а неустановленная их природа вносит существенные сомнения в интерпретацию значительной части литературы по коррелятам туморогенности. Необхо-
23
димо отметить, что третья установленная линия клеток ВНК21/С13 хомячка, которая наиболее часто использовалась как нормальный контроль в исследованиях на туморогенность, в действительности явно опухолевая (Defendi et al., 1963; MacPherson, 1963; Stoker, MacPherson, 1964; Schoental, 1967; Friedman, Shin, 1974; Berman, 1975; Kahn, Shin, 1979). Заключения о коррелятах туморогенности, основанные на нормальном состоянии этой линии, неправильны.
2.3. КЛЕТОЧНАЯ МОРФОЛОГИЯ
2.3.1. Цитологические корреляты
Морфологические изменения были обнаружены среди первых клеточных эффектов, наблюдаемых в клеточных культурах сразу после воздействия трансформирующими агентами (Earle, Nettleship, 1943), и несколько лабораторий даже представили (с нашей точки зрения анекдотичные) доказательства изменений цитологических особенностей, таких, как размер и форма клетки, кариотип, ядерное число, морфология ядра, ядерно-цитоплазматическое отношение, характер цитоплазматической окраски вследствие онкогенной трансформации (Sanford, 1965; Montesano et al., 1977). Однако несколько попыток было предпринято для определения статистической корреляции между цитологическими признаками и туморогенностью. В одном из самых ранних исследований (Sanford et al., 1950) обследовали пять отдельных видов фибробластов мышей от их первоначального выделения до саркоматозной трансформации. Наблюдая множество морфологических изменений, они не смогли обнаружить такое из них, которое коррелировало бы с туморогенностью.
Последующие исследования подтвердили утрату индивидуальных морфологических коррелятов туморогенности при световой микроскопии в системе фибробластов (см. обзор Sanford, 1965). Недавно было обращено внимание на эпителиальные клеточные линии. При наблюдении за 15 различными цитологическими признаками Montesano и соавт. (1977) обнаружили, что базофилия цитоплазмы и ядерно-цитоплазматическое отношение индивидуально коррелировали с онкогенностью эпителиальных линий печени крысы. Оба коэффициента корреляции превышали 0,7, и в обоих случаях различия были существенны при уровне значимости /?^Г0,01. Для других из 13 обследованных признаков не обнаружена существенная корреляция с туморогенностью. Однако когда классификация основывалась на совместном рассмотрении всех 15 цитологических признаков, а не на единичных индивидуальных особенностях, то нормальные и опухолевые линии отличались друг от друга в 94 % случаев (Montesano et al., 1977). Использование множественных критериев обеспечивает также возможность определения различий нормальных и опухолевых линий фибробластов, если индивидуальный цитологический признак не существенно коррелирует с туморогенностью (Barker, Sanford, 1970).
