Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
реза на бумаге.
больших количествах, что допу
Для определения агропина
ис скает прямое определение в гру
пользуют метод окрашива
бых экстрактах. Быстрый и про
ния серебром
стой метод
?-Г алактозидазан> ONPG Колориметрический анализ
ак Достаточно легкие методы экстрак
(Lac Z) (о-нитрофеиил-^-D-ra- тивности фермента в рас
ции для анализа in vitro и про
лактопиранозид) тительных экстрактах.
стые для анализа in vivo. Одна
X-GAL Используют для анализа
ко интерпретация результата
in vivo культивируемых
иногда затруднительна из-за при
растительных клеток
сутствия эндогенной р-галакто
зидазы у многих растений
^-Глюкуронидаза,5> Ряд субстратов в зави Колориметрические,
флуорес Разработан ряд чувствительных, ко
(6US) симости от теста центные и гистохимиче-
личественных методик определе-
Продолжение
Скринируемые маркеры Обычные субстраты Метод анализа
Комментарии
и анализ
Фепмент
(сокращенное обозначение)
Люцифераза 16) (бакте- Деканал+ FMNH2 Био люминесцентные анализы
Анализ количественный и быстрый,
риальная lux) in vitro и in vivo
однако требуется флуориметр.
Не
сообщалось об интерфери
рующих активностях. Функцио
нально активный фермент состо
ит
из двух различных полипеп
тидов
Люцифераза17) (светля ATP+Oj+люциферин Биолюминесцентные анализы
Люцифераза насекомых состоит из
ка) in vitro и in vivo
одного полипептида и, следова
тельно, представляет более про
стой объект для генной инже
нерии. Анализ такой же, как
описан выше
') Только примерный' диапазон, основывающийся главным образом на
уровнях, которые ингибируют рост каллуса и/или регенерацию побегов N.
tabacnm. г) [13, 29, 37].
3) [11, 30, 721.
64].
80].
48].
7) До сих пор неизвестна ферментативная функция, связанная с
резистентностью к блеомицииу. Неизвестна и функция соответствующего гена.
*) [37].
9) [66]. ю) [38]_
") В некоторых случаях CAT использовалась как селективный маркер.
Показано, что хлорамфеиикол представляет собой слабый селективный агент
для каллуса, но существенно ингибирует рост корней и вызывает повеление
культивируемых побегов и проростков.
,2) Ш.
13) [60]. н) [36].
,6) [451.
") [47].
,?) [58].
ТСХ - тонкослойная хроматография.
Трансформация клеток двудольных растений
101
руют активность анализируемого фермента, конкурируют за те же кофакторы,
субстраты и т. д. и, таким образом, делают анализ ненадежным.
Следовательно, важно проконтролировать все эти факторы, прежде чем
использовать какой-либо маркерный ген для скрининга.
Особый случай представляет использование генов-"репорте-ров" -
индикаторных генов. Их применяют при разработке си-, стем трансформации
для "транзиторной" или кратковременной ("transient") экспрессии, при
предварительном анализе конструируемых векторов (гл. 3) и тестировании
последовательностей ДНК, способных регулировать экспрессию геиов в
стабильно трансформированных тканях (гл. 6).
2.1.3.3. Использование неонкогеииых плазмид в качестве тУ-помощииков
Селекцию растительных клеток, трансформированных неон-когенными
векторами, на фоне нетрансформированных клеток можно осуществить по их
