Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
трансформированных клеток. При использовании скринируемых маркеров важные
факторы - это простота, дешевизна и специфичность методов детектирования.
Современные методы анализа для наиболее часто используемых скринируемых
маркеров (хлорамфениколацетилтрансфераза, октопин- и нопалинсинтаза,
агропин, p-глюкуронидаза, р-галактозидаза и люцифераза) относительно
дешевы и просты в осуществлении (табл. 2.1). Однако некоторые грубые
тканевые экстракты могут содержать соединения, которые затрудняют
интерпретацию результатов или обладают неспецифической активностью,
имити-
Селективные маркерные гены Субстраты чувствительность
Конструкции ностн, обеспечи
Фермент (селективные ткани контрольно
ваемые различны
(сокращенное обозначение) агенты) го растения
ми конструкциями
(мкг/мл)1)
(мкг/мл)
Неомицинфосфотрансфераза II Неомицин 50---250 nos-npf-
///nos ро!у(А)2> 75---100 Кш
(NPT И) Канамицин 5---35 n os -
"pf -///n os' р о1 у (А) 300---1000 Кш
G418 3-10 CaMV-
35S-npM//nos poly(A)4) 500---2000 Km
Гигромицинфосфотрансфераза Гигромицин-В 3---10 nos-
hptjnos poly (А)5 > 50---100 Hm
(НРТ) CaMV-
19S-ftp*/nos poIy{A)e> 30---50 Hm
Геи устойчивости к блеомици- Блеомищш 1---5 CaMV-
35S-bte/nos poly(A)6> 5---10 В1
ну (BLE) 7>
Дигидрофолатредуктаза Метотрексат 0,01---0,5 iios-
DHFR/nos poly (A)8) 0,05-0,5 Mt
(DHFR Mtr) Триметоприм 8---16
5-Енолпирувилшнкимат-З-фос- Глифосат <0,1 мМ CaMV-
35S-EPSPS/nos >5 мМ глифосата
фат.си-нтаза (EPSPS)
poly(A)°>
(Скринируемые маркеры) Обычные субстраты Метод анализа
Комментарии
и анализ
Фермент
{сокращенное обозначение)
Хлорамфениколацетил- [ИС1 Хлорамфеникол+ Используют грубые
раститель Очень чувствителен --- количествен
траисфераза10* + ацетил-КоА ные экстракты и ТСХ для
раз ные результаты при малом коли
(CAT) и" деления ацетилироваиного
честве ткани. У некоторых видов
и иеацетилировакного
наблюдается низкий уровень эн
[иС]-хлорамфеникола. Оп
догенного ацетидирования Cm
ределение путем автора
диографии
i 1
Нопалинсинтаза12* (Nos) Аргинин+а-кетоглутаро- Инкубируют ткань в среде,
со Очеиь чувствительный флуоресцент
вая кислота держащей оба субстрата.
ный краситель (фенантренхи-
Грубый экстракт анализи
нон). Для анализа достаточно
руют с помощью электро
50 мг ткани. Неопииовые соеди
фореза на бумаге и опре
нения, случайно мигрирующие
деляют нопалин путем
вместе, тоже окрашиваются и
флуоресцентного окраши
могут затруднять анализ
вания
Октопиисиитаза12* (Ocs) Аргии+пируват Так же, как нопалии
Ocs менее активна, чем Nos, и по
этому дает более слабый сигнал
Агропии13* Аналйз с помощью
электрофо Агропии в норме присутствует в
