Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
- Пластиковые одноразовые стандартные пробирки (Sterilin Ltd.).
- Стеклянные стандартные пробирки.
- Конические колбы на 2 л. 500 и 250 мл.
82
Глава 1
- Пластиковые кюветы (на 3, 1 и 0,5 мл).
- Стеклянные стаканы и измерительные цилиндры из пирекса от 50 мл до 2
л.
Приложение 1 [II]
А. Используемые в примерах бактериальные штаммы
Наименование Описание Устойчивость Источник
к антибио
тикам
JM83 Е. coli Sm [41]
С58С1 (pGV3850) A. tumefaciens Cb, Rf [61
GJ23 Е. coli Km, Тс [55
LBA4404 A. tumefaciens Rf [29
HBlQl/pRK2013 Е. coli Km [18
MC1022/pBinl9 Е. coli Km [8]
Б. Антибиотики, используемые для селекции бактерий
Наименование Концентра ция для се- Исходный Раствори
лек ции раствор тель
В. coll A. tumefaciens (мг/мл)
(мкг/мл) (мкг/мл)
Ампициллин (Ар) 50,0 _ 25,0 Н20
Карбенициллин (СЬ) 100,0 100,0 50,0 н2о
Канамицин (Km) 100,0 100,0 100,0 н2о
Рифампицин (Rf) 100,0 100,0 50,0 Метанол
Тетрациклин (Тс) 15,0 2,5 12,5 Этанол
Стрептомицин (Sm) 12,5 300,0 900,0 Н20
Спектиномицин (Sp) 50,0 100,0 50,0 н2о
Цефотаксим (Сх) 250,0 250,0 HjO
Все водорастворимые антибиотики стерилизуют фильтрова-нием (размер
пор фильтра 0,22 мкм), а затем хранят в виде замороженных исходных
растворов при -20 °С. Канамицин и карбенициллин относительно стабильны и
часто могут сохраняться без разрушения до 1 мес при 4 °С. Рифампицин и
тетрациклин следует взвесить в стерильных пробирках и затем добавить
необходимое количество метанола или этанола соответственно. После
тщательного встряхивания антибиотики должны раствориться и также будут
стерильны. Следует готовить такие количества растворов антибиотиков,
которые вы собираетесь использовать в течение 2-3 нед. Кроме того,
следует
Агробактериальные трансформирующие векторы растений 83
отметить, что при комнатной или более высоких температурах и на свету
многие антибиотики быстро разрушаются и теряют активность.
Антибиотики можно добавлять непосредственно в жидкую среду или в
расплавленную и охлажденную (45-55 °С) агари-зованную твердую среду (см.
разд. 1.3.5).
Литература
1. Albright L. М., Yanofsky М. F., Leroux В., Ма D" Nester Е. W. (1987)
Processing of the T-DNA of Agrobacterium tumefaciens generates border
nicks and linear, single-stranded T-DNA. J. Bact. 169, 1046-55.
2. An G. (1985) High efficiency transformation of cultured tobacco
cells. Plant Physiol. 79, 568-70.
3. An G. (1986) Development of plant promoter expression vectors and
their use for analysis of differential activity of nopaline synthase
promoter in transformed tobacco ceils. Plant Physiol. 81, 86-91.
4. An G., Watson B. D., Stachel S., Gordon M. P., Nester E. W. (1985)
New cloning vehicles for transformation of higher plants. EMBO J. 4, 277-
84.
5. Andre D" Colau D., Schell J., Van Montagu M" Hernalsteens J. (1986)
Gene tagging in plants by a T-DNA insertion mutagen that generates
APH(3')II-plant gene fusions. Mol. Gen. Genet. 204, 512-18.
6. Ashby A. М., Watson M. D., Shaw С. H. (1987) A Ti plasmid determined
function is responsible for chemotaxis of Agrobacterium tumefaciens
towards the plant wound product acetosyringone. FEMS Microbiol. Lett. 41,
189- 92.
7. Beaty J. S., Powell G. K., Lica L., Regier D. A., MacDonald E. M.
S., Horn-mes N. G., Morris R. O. (1986) Tzs, a nopaline Ti plasmid gene
from Agrobacterium tumefaciens associated with trans-zeatin biosynthesis.
Mol. Gen. Genet. 203, 274-80.
8. Bevan M. W. (1984) Binary Agrobacterium vectors for plant
transformation. Nucl. Acids Res. 12, 8711-21.
9. Bevan M. W., Mason S. E., Goelet P. (1985) Expression of tobacco
mosaic virus coat protein by cauliflower mosaic virus promoter in plants
transformed by Agrobacterium. EMBO J. 4, 1921-6.
10. Birnboim H. C., Doly J. (1979) A rapid alkaline extraction procedure
for screening recombinant plasmid DNA. Nucl. Acids Res. 7, 1513-23.
11. Boulnois G. (1987) Gene Cloning and Analysis: A Laboratory Guide.
Black-well, Scientific Publications, Oxford.
12. Byrne М. C., McDonnell R. E" Wright М., Carnes M. G. (1987) Strain
and cultivar specificity in the Agrobacterium - soybean interaction.
Plant Cell, Tissue and Organ Culture 8, 3-15.
13. Caplan A., Herrerra-Estrella L., Inze D., Van Haute E., Van Montagu
М., Schell }., Zambryski P. (1983). Introduction of genetic material into
plant cells. Science 222, 815-21.
