Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
/
-с
ч /
N—СН
с-сн5
СН.-СН.ОН
Аневрин в организме весьма легко вступает в соединение с фосфорной кислотой, образуя двухфосфорное производное—дифосфор-ный эфир аневрина1.
В 1937 г. Ломан и Шустер (14) из 1 кг дрожжей выделили такое соединение в количестве 60 мг, причем оказалось, что оно является коферментом карбоксилазы, расщепляющей пировино-
1 В тканях пресноводных рыб обнаружен фермент тиазолаза, обусловливающий окисление витамина Вх.
.градную кислоту по схеме:
СН3СОСООН->СН3 сон +со21.
Формула кокарбоксилазы:
h\Jc- снг-н<? | си,
Карбоксилаза была известна давно: еще в 1912 г. было установлено, что спиртовое брожение дрожжей происходит при обязательном участии этого фермента.
Из химических свойств кофермента карбоксилазы следует отметить то, что под действием минеральных кислот 2-я молекула фосфорной кислоты легко отщепляется, тогда как 1-я молекула, непосредственно соединенная с тиазоловым кольцом, такому расщеплению подвергается с большим трудом и может быть отнята лишь при помощи ферментативного гидролиза (в присутствии фосфатазы).
Дважды фосфорилированный аневрин обладает, следовательно, всеми свойствами кокарбоксилазы, а при отщеплении от кокарбоксилазы одной молекулы фосфорной кислоты это вещество теряет свои энзиматические свойства.2
Изучая свойства кокарбоксилазы, путем гидролитического расщепления кокарбоксилазы фосфатазой весьма легко добились отщепления обеих молекул фосфорной кислоты и в остатке получили аневрин, кристаллизовавшийся в виде пикролоната с характерной точкой плавления.
Вскоре же после опубликования этих работ была сделана попытка синтезировать кокарбоксилазу путем обработки на холоду гидрохлорида аневрина хлорокисью фосфора3. Синтез был успешно осуществлен, а синтезированное соединение давало все характерные реакции кокарбоксилазы (наличие ацетальдегида, количественный выход Сб2 и т. д.). Еще лучшие результаты были получены, когда синтез вели из аневрина с фосфатом в присутствии фосфатазы, выделенной из животных тканей. Синтез в этом случае протекал необыкновенно гладко, в связи с чем стало возможным подтвердить
1 Процесс расщепления пировиноградной кислоты в организме представляется, конечно, значительно более сложным.
2 Энергичный гидролиз N раствором НС! в течение 15 минут при 80° разрушает кокарбоксилазу и дает две молекулы Н3Р04. Кобальт и медь также способствуют разрушению кокарбоксилазы, однако в меньшей степени.
3 Кокарбоксилаза была получена из аневрина и аденозинтрифосфорной кислоты; схематически эта реакция представляется так: аденозинтриофосфат-f-+тиамин—>адениловая кислота -(-кокарбоксилаза.
— №г— скг —t
Сн СН
I
I —Р —ОН
II
о
прежние предположения исследователей о том, что фосфорилиро-вание аневрина в живой клетке протекает под Действием ферментов, принимающих участие в системе гликолиза, что этот процесс для своего осуществления требует анаэробных условий и что аневрин, будучи фосфорилирован в дифосфорный эфир, является носителем ферментных функций в организме.
Этим путем была разрешена одна из сложнейших проблем биохимии—проблема декарбоксилирующих ферментов.
Моноиодоуксусная кислота' и некоторые иодистые производные тормозят (ингибитируют) действие кокарбоксилазы, что, как мы увидим ниже, можно поставить в свйзь с антагонистическим взаимодействием в организме между тироксином и витамином Вг
МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНЕВРИНА
Для количественного определения аневрина предложено большое количество отдельных реакций и тщательно разработанных методов. Мы опишем здесь лишь наиболее распространенные.
Всеобщее признание получил флуорометрический метод (15, 16), Ниже мы излагаем описание фЛуорометрического метода в том виде, как он применяется в ряде научно-исследовательских и производственных лабораторий.
В основе метода лежит описанная нами реакция превращения аневрина в тиохром и измерение интенсивности флуоресценции образовавшегося тиохрома. Реакция протекает количественно, а само определение при некотором навыке дает вполне точные и удовлетворительные результаты.
Определение витамина Bj (общего количества) (17)
Техника метода
Навеску образца в количестве 1—10 г (в зависимости от ожидаемого содержания витамина) растирают в ступке с 0,1 N раствором H2S04 и переносят в колбу, доводя объем тем же раствором приблизительно до 75 мл. Колбу ставят на гидролиз в кипящую водяную баню на 45 минут, время от времени помешивая.
