Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Аберкромби Д. -> "Аффинная хроматография" -> 93

Аффинная хроматография - Аберкромби Д.

Аберкромби Д., Алленмарк С, Арамэ С, Бара-бино Р. Аффинная хроматография — М.:Мир, 1988. — 278 c.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка): affinnayahromotograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 106 >> Следующая

Селективный лизис эритро цитов хлори дом аммония
Лизис эритро цитов быка
Лизис эритро цитов быка
Описаны только экспери менты по об наружению связавшихся клеток
Осторожное гидростатическое дав ление (пипе-тирование)
Механические
Механические
Разделение клеток
245
Продолжение табл 1.
Матрица
Иммобилизованный лиганд
Клетки, специфически адсорбированные на аффинном носителе
Способы выделения связавшихся клеток
чашки Пластиковые чашки
Полиакриламидные шарики
Шарики се-фадекса
Пластиковые Антитела козла против Ig мыши
— Антитела кро лика против Ig мыши
— F(ab')2 фрагмент антител кролика против Ig мыши
Антитела кролика против IgG мыши (ковалентно присоединенные к шарикам) Антитела против F(ab'b человека
Шарики ага розы-поли акролеина
Пластиковые чашки
I) Антитела козла против IgG кролика
2) Антитела козла против Ig мы ши, анти-Thy 1,2, агглютинин соевых бобов (присоединенные через по-лилизинглута-ральдегидную вставку) Антитела к флуо ресцеину
Ig+ клетки селезенки
мыши Ig+ клетки селезенки
мыши
Подгруппы Т-клеток человека, меченных мышиными MOHO-клональными OKT и OKT8 антителами
Очистка В лимфоцитов человека (содержащих поверхностный Ig)
1) Эритроциты чело века, обработан ные антителами кролика против эритроцитов человека
2) Разделение В- и Т-спленоцитов мы ши
Энергичное пи-петирование
Энергичное пи-петирование
Избыток антител козла против IgG мыши
Избыток Ig человека
Осторожное пе ремешивание шариков
Фракционирование лимфоцитов человека, меченных специфическими анти телами с присоединенным флуорес-цеином:
— Т-клетки фага-помощника, меченные анти-Ьеи-За
— супрессорные T-клетки, меченные анти-Ьеи-2а-моно-клональными антителами
— клеточные линии T-ALL, меченные aHTH-T-ALL-анти-телами
Обращение связывания с флуоресцеин-L-лизином + '+ осторожное отсасывание
Продолжение табл 1.
Матрица
Иммобилизованный лиганд
Клетки, специфически адсорбированные на аффинном носителе
Способы выделения связавшихся клеток
Литература
Сефароза 6 MB
Пластиковые трубки
Пластиковые чашки
Пластиковые чашки
Найлоновые диски; шарики латекса
Пластиковые чашки, покрытые желатином
Ковалентно свя занный белок А
Ig человека (им мобилизован на пластиковых Хрубках карбо
ДИИМИДНЫМ МЄ
тодом) + белок А+антитела против специфической антисы воротки
IgG (присоединен к чашкам кар бодиимидным методом) + белок А+антисыворотка, специфичная для антигенов клеточ ных мембран (сыворотка кро лика против ал лотипа)
Гаптенированный | Клетки желатин (ДНФ желатин), адсорбированный на пластике
B-лимфоциты че ловека, меченные флуоресцеиниро-ванными антителами против Ig че ловека — Тимоциты мыши, обработанные ан ти-6-Ig кролика Лимфоциты селезенки мыши, обра ботанные антителами кролика против Ig мыши Лимфоциты перифе рийной крови человека, инкубированные со специфиче ской антисыворот кой
Субпопуляция лим фоцитов кролика
ДНФ, иммобилизованный химически однозначным методом через S-S-связи
Фосфорилхолин, связанный с желатиновым покрытием через S—S-связь
селезенки связывающие антиген
Избыток IgG собаки или механическая обработка
Соскабливание с поверхно сти иммуно-адсорбента
Соскабливание с поверхно сти иммуно адсорбента
Клетки селезенки, связывающие антиген
Клетки селезенки, связывающие антиген
Плавление желатина, затем ферментативное расщепление ДНФ-жела-тина колла-геназой
— термические
— расщепление S—S-связи IO мМ мер-каптоэтано-лом
Расщепление S—S-связи 50 мМ ди-тиотреитолом
Разделение клеток
247
шиє из предложенных методов (табл. 1), три из которых получили наиболее широкое применение.
1) Розеточные методы [4—8]: фиксация антимышиных иммуноглобулинов на эритроцитах быка (с помощью хлорида хрома) и обработка в розетках выделяемыми клетками, предварительно покрытыми специфическими моноклональными антителами (продуцируемыми мышиной гибридомой); выделение связавшихся клеток достигается селективным лизисом эритроцитов,
2) Чашечные методы [9—15]: адсорбция антител на полисти-рольных чашках (химически неопределенным способом); наиболее часто используются методы двойных антител, т. е. пластиковые чашки, покрытые антителами против мышиных иммуноглобулинов, селективно связывают клетки, предварительно обработанные специфическими моноклональными антителами.
3) Методы с использованием белка А из Staphylococcus aureus [8, 20—23]. Белок А обладает свойством теоретически обратимо связывать Fc-фрагмент IgG (белок А — бивалентный); разделение клеток может быть достигнуто с иммуноглобулин-специфическими носителями, покрытыми белком А: белок А связывается или непосредственно с шариками или с пластиковыми
' поверхностями, покрытыми иммуноглобулином; иммобилизованный таким образом белок А может либо прямо взаимодействовать с клетками, покрытыми специфическими антителами, либо обрабатывается антителами, направленными против специфических антител, используемых для узнавания выделяемой клеточной популяции.
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 106 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed