Аффинная хроматография - Аберкромби Д.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка):
2) Полученное S-ацетилпроизводное обрабатывают в течение
Разделение клеток
259
16 ч при комнатной температуре в темноте равным объемом мерсалил-трисакрила.
3) Анти-ТЬу-1,2-мерсалил-трисакр иловый гель инкубируют с тимоцитами мыши в течение 2 ч при 4 °С в среде Хенка, содержащей 0,1% (масс./об.) БСА и 0,1% (масс./об.) азида натрия.
На рис. 7, а показано связывание тимоцитов из ТЬу-1,2-поло-жительной линии мышей (С 57/BL 6): эти тимоциты были элюи-рованы в жизнеспособном состоянии при 2-часовой обработке 25 мМ дитиотреитолом в указанной выше среде (рис. 7,6). Связывание тимоцитов с анти-ТЬу-1,2-мерсалил-трисакрилом было специфичным, поскольку тимоциты из Thy-1, !-положительной линии мышей (С 57/KA из лаборатории д-ра Боннье, Льеж) не адсорбировались на том же аффинном носителе (рис. 7,в).
4. ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЕ ЗАМЕЧАНИЯ
Развитие методов разделения клеток с помощью аффинной хроматографии в значительной степени задерживалось ввиду трудностей возврата клеток, связавшихся с аффинными носителями. Хотя для решения этих проблем были предложены различные подходы, до сих пор не найдено единого универсального метода. В этой главе рассмотрен метод с использованием расщепляемых вставок: матрица представляет собой трисакрило-вые шарики, не взаимодействующие с клетками. Ртутьорганиче-ское соединение мерсалил ковалентно иммобилизуют на матрице в результате простой химической реакции, и после этого ли-ганды, тиолированные продажным гетеробифункциональным реагентом (S-АМЯА), реагируют с иммобилизованным мерсали-лом: образующаяся Hg—S-связь может быть расщеплена при действии тиола легче, чем дисульфидная связь, что особенно важно, когда имеется возможность мультивалентного связывания тиолированного лиганда с матрицей.
Предварительные результаты подтверждают, что процесс, заключающийся в иммобилизации антител против иммуноглобулинов мыши на мерсалил-трисакриле и выделении клеток, предварительно покрытых специфическими моноклональными антителами мыши, может применяться как общий метод. Этот процесс, уже использованный в «чашечных методиках», требует лишь небольших количеств указанных моноклональных антител (Бонафо и др., неопубликованные данные). Этот метод имеет хорошие перспективы использования для разделения подгрупп специфических клеток и выделения антигенспецифических лимфоцитов.
5. БЛАГОДАРНОСТИ
Мы благодарим д-ра Г. Видаля и д-ра П. Понцелета (CHn-Mindy-SANOFI Research Center, Montpellier) за предоставле-
260
Глава 8
ниє моноклональных антител и полезные дискуссии и Р. Ларгье и Н. Бернада за квалифицированную техническую помощь. Эта работа получила финансовую поддержку от Direction du Development Scientifique et Technologique et de !'Innovation (грант № 82.V.0016), Centre National de Ia Recherche Scientifique и Fondation pour Ia Recherche Medicale Frangaise.
Литература
1. Edelman G. M., Rutishauser U.t in: Methods in Enzymology, Vol. 34, Jako-by N. B.( Wilchek M. (eds.)( Academic Press, New York, 1974, p. 195.
2. Haas W., von Boehmer #., in: Current Topics in Microbiology and Immunology: Techniques for Separation and Selection of Antigen Specific Lymphocytes, Haas W., von Boehmer H. (eds.), Springet Verlag, New York, 1978, P. 1.
3. Sharma S. K., Mahendroo P. P.9 J. Chromatogr., 184, 471 (1980).
4. Basch R. S., Berman J. W., Lakow ?., J. Immunol. Methods., 56, 269 (1983).
5. Stocker /. W., Garotta G„ Hausmann В., Trucco M., CeppelUni R., Tissue Antigens, 13, 212 (1979).
6. Egeland Г., Lea Т., J. Immunol Methods., 55, 213 (1982).
7. Mills K., Armitage R., Worman C9 Immunol. Lett., 6, 241 (1983).
8. Karavodin L. M., Golub S. #., J. Immunol. Methods., 61, 293 (1983).
9. Tsoi Af. S., Aprile J., Dobbs S., Goehle S., Storb R.t J. Immunol. Methods., 53, 293 (1982).
10. Reinherz E. L., Penia A. C, Hussey R. E4 Schlossman S. F„ Clin. Immunol. Immunopathol., 21, 257 (1981).
11. Payne S. M., Sharrow S. 0., Shearer G. M., Biddison W. E.f Int. J. Immuno-pharmacol., 3, 227 (1981).
12. Mage M. G., McHugh L. L., Rothstein Т. L., J. Immunol. Methods, 15, 47 (1977).
13. Wysocki L. J., Sato V. L., Proc. Natl. Acad. Sei USA, 75, 2844 (1982).
14. Fong S., Tsoukas C. D.? Pasquati J. L.t Fox R. 1., Rose J. E., Raiklen D., Carson D, A., Vaughan J. //., J. Immunol. Methods, 44, 171 (1981).
15. Fong S., Fox R. 1., Rose J. E., Liu J., Tsoukas C. D., Carson D. A., Vaughan J. H., J. Immunol. Methods, 46, 153 (1981).
16. Braun R., Teute H., Kirchner H., Munk /С., J. Immunol. Methods, 54, 251 (1982).
17. Chess L., McDermott R. P., Schlossman S. F., J. Immunol,, 113, 1113 (1974).
18. Anderson К. C, Griffin I. D., Bates M. P. M., Slaughenhoupt B. L., Schlossman S. E.t Nadler L. Af., J. Immunol. Methods, 61, 283 (1983).
19. Marget S,t Ofarim M., Eshhar Z., J. Cell Sei., 62, 149 (1983).
20. Gheti V., Mota G., Sjoquist I., J. Immunol. Methods., 21, 133 (1978).
21. Bundesen P. G., Gordon J. Immunol. Methods, 30, 179 (1979). «
22. Nash А. J. Immunol. Methods, 12, 149 (1979).
23. Langone J. J. Immunol. Methods, 55, 277 (1982).
