Аффинная хроматография - Аберкромби Д.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка):
периодата сефарозе CL 6В......... 68'
9. Полиизоцианатна*я активация гидроксилсодержащих полимеров 71
9.1. Некоторые сведения об используемых матрицах ... 71
9.2. Методика активации на примере сферической целлюлозы 71
9.3. Методика присоединения.......... 72
9.4. Сравнение с другими методами присоединения .... 73 10. Иммобилизация с использованием органических сульфонилхло-
ридов................ 74
10.1. Введение.............. 74
10.2. Методика.............. 76-
П. Введение функциональных групп в агарозные шарики путем
карбоксиметилирования и образования аминоэтиламидного производного ............... 77
11.1. Введение.............. 77
11.2. Методика.............. 79
11.3. Заключительные замечания......... 82
Литература............... 8$
Глава 3. Поперечно-сшивающие агенты для присоединения
вставок к матрицам.......... 84
1. Введение............... 84
2. Методы присоединения нуклеофильных лигандов к карбоксилат-содержащим матрицам с использованием карбодиимидов 84
3. Получение гидроксисукцинимид-агарозы....... 85
3.1. Присоединение лигандов к агарозе, содержащей гидроксисук-
цинимидные сложноэфирные группы....... 86-
4. Получение сукцинилированной аминоалкилагарозы .... 86
4.1. Получение N-алкиламии-агарозы........ 86
4.2. Сукцинилирование............ 87
5. Ацилазидная активация........... 87
5.1. Получение гидразидо-агарозы......... 87
5.2. Получение ацилазидо-агарозы........ 88
6. Иммобилизация белков на полиакриламидных шариках с использованием глутарового альдегида......... 88
6.1. Получение и активация шариков........ 88
6.2. Активация шариков........... 89
7. Методики присоединения с использованием дивинилсульфона 90
7.1. Активация агарозных шариков........ 90
7.2. Присоединение к дивинилсульфон-агарозе..... 90
8. Методики присоединения, основанные на использовании диазо-ниевых групп.............. 90
8.1. Получение NAD-агарозы.......... 90
8.2. Получение диазоний-агарозы......... 91
9. Присоединение лигандов через реакционноспособные азокрасители 92
9.1. Получение регенерированной целлюлозы...... 92
9.2. Определение содержания целлюлозы в суспензии регенерированной целлюлозы............ 92
9.3. Присоединение реакционноспособного азокрасителя к регенерированной целлюлозе и восстановление до аминоарил-цел-люлозы............... 93
9.4. Диазотирование аминоарилцеллюлозы и присоединение бел-
ков ............... 93
9.5. Присоединение гонадотропина хориона человека к сефарозе
CL 4В с использованием активации реакционноспособным
азокрасителем............. 95
10. Получение тиол-агароз............ 97
10.1. Активированная глутатион-агароза....... 97
Оглавление
275
10.2. Получение тиопропил-агарозы........ 98
Литература............... 99
Глава 4. Методики проведения эксперимента юо
1. Определение концентрации лиганда на сорбенте..... 100
1.1. Дифференциальный анализ......... 100
1.2. Спектрофотометрия гелей.......... 100
1.3. Солюбилизация гелей........... 100
1.4. Кислотный или ферментативный гидролиз..... 101
1.5. Элементный анализ........... 101
1.6. Радиоактивные методы.......... 101
177. Определение аминов с использованием 2,4,6-тринитробензол-
сульфоновой кислоты (ТНБС)......... 102
1.8. Определение алкиламиногрупп, присоединенных к CNBr-ак-
тивированной агарозе ........... 102
2. Отщепление лиганда............ 102
3. Влияние концентрации лигандов......... 104
4. Влияние размеров колонки .......... 104
5. Влияние скорости потока и времени инкубации..... 105
6. Влияние pH и температуры.......... 109
6.1. Влияние pH............. 109
6.2. Влияние температуры........... ПО
7. Ионная сила............... 112
8. Методы десорбции............. 113
8.1. Конкурентное элюирование лигандом...... 113
8.2. Элюирование коферментами......... 114
8.3. Изменение ионной силы.......... 116
8.4. Изменение растворителя.......... 116
8.5. Элюирование путем изменения температуры..... 117
8.6. Изменение буфера и/или pH......... 118
8.7. Хаотропные реагенты........... 119
8.8. Электрофоретическая десорбция........ 119
9. Использование цилиндрических перегородок в крупномасштабных аффинных колонках............ 122
9.1. Введение.............. 122
9.2. Результаты и обсуждение.......... 124
10. Изготовление и использование мини-колонок для высокоэффективной аффинной хроматографии......... 124
10.1. Изготовление колонок.......... 125
10.2. Упаковка колонки............ 125
Литература............... 128
Глава 5. Лиганды для иммобилизации...... 130
1. Нуклеиновые кислоты............. 130
1.1. Связывание ДНК с КМ-целлюлозой....... 130
1.2. Иммобилизация нуклеиновых кислот на бисоксиранактивиро-ванных полисахаридах........... 131
1.3. Иммобилизация ДНК на целлюлозе с использованием водорастворимого карбодиимида как конденсирующего агента 132
1.4. Получение олиго(аТ)-целлюлозы........ J32
1.5. Получение поли (U)-целлюлозы........ *33
1.6. Получение поли (U), присоединенной к пористым стеклянным фильтрам........... 134
