Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
устойчивости к тетрациклину, переносимого ТпЮ. Наличие смешанных колоний
с синими и белыми секторами-это ключевой результат. Поскольку частота
встречаемости секторных колоний высока, а транспозиция-это редкое
событие, то секторные колонии должны возникать в основном при единичной
транспозиции. В случае репликативного механизма может переноситься только
одна цепь родительского гетеродуплекса и, таким образом, могут
образовываться только белые или синие колонии в зависимости от того,
какая из цепей переносится. При нерепликативном способе, напротив,
переносятся обе цепи гетеродуплекса, и в результате репликации и
сегрегации в дочерних клетках бактерий они дают начало секторным
колониям. (Если исходно бактерии были распределены по поверхности
агаровой среды в чашке Петри, то все потомки первоначальной
инфицированной клетки, оставаясь в непосредственном контакте друг с
другом, образуют колонию. Если при первом делении образуются две разные
дочерние клетки, то их потомки размножаются рядом, создавая единую
колонию, но с секторами, образуемыми двумя вариантами бактерий.) Чисто
синие и чисто белые колонии возникают в результате транспозиций, в
которых участвуют гомодуплексы. Количественное соотношение синих, белых и
секторных колоний определяется тем, что гетеродуплексы (дающие начало
секторным колониям) и гомодуплексы (дающие начало колониям одного цвета)
содержались в смеси в равных количествах.
Б. Каждый гетеродуплекс содержит область ДНК с неправильным
спариванием, соответствующую положению мутации в /acZ-гене. Если эти
гетеродуплексы ввести в бактерии, которые могут репари-ровать такие
неправильные спаривания, то частота появления секторных колоний будет
ниже, чем в описанном опыте. По-суще-ству каждый акт репаративного
восстановления должен превращать гетеродуплекс в гомодуплекс. Если
репарация неправильного спаривания оснований будет спонтанной,
ненаправленной, то ча-
306 Г лава 5
Y Ген К
Т Ген А
Q Ген В
- - ТАСАА ---------
ЗАМЕНА С НА G
• Ген К
R Ген А
Е Ген В
- - TAGAA - -Последовательность ДНК
Рис. 5-57. Множественные мутационные изменения, вызываемые изменением
единственного основания в области перекрывания генов (ответ 5-45).
стота появления синих и белых колоний должна возрасти одинаково.
В. Если бы вы использовали интегрируемую форму фагового генома, то
выжившие колонии могли бы образоваться в результате сайт-специфической
рекомбинации, которая происходит чаще, чем транспозиция. При сайт-
специфической рекомбинации обе цепи фагового генома встраиваются (как
описано в МБК, см., в частности, рис.
5-67). Таким образом, доля синих, белых и секторных колоний была бы
такой же, как в случае нерепликативной транспозиции. Действительно, в
реальных исследованиях, проведенных для выяснения механизма транспозиции
ТпЮ, в качестве положительного контроля использовали интегрируемую (но
нереплицирующуюся) форму бактериофага лямбда. В обоих экспериментах были
получены одинаковые результаты.
Литература: Bender, J.; Kleckner, N. Genetic evidence that TnlO
transposes by a nonreplicative mechanism. Cell 45, 801-815, 1986.
5-45
A. Поскольку у бактериофага фХ174 есть только одна мРНК, то все четыре
его гена должны быть закодированы в этой РНК. При синтезе белка рибосомы
движутся вдоль мРНК в направлении от 5'- к З'-концу, поэтому все четыре
гена транслируются, как указано на рис. 5-37, слева направо.
Б. Гены А, В и К должны транслироваться в разных рамках считывания, т.
к. стоп-кодон в конце гена В обходится при синтезе А и К, а стоп-кодон в
конце гена А обходится при синтезе К. Аналогичным образом гены А, К и С
тоже транслируются в разных рамках считывания. Имеются только три
отдельные рамки считывания (поскольку каждый кодон состоит из трех
нуклеотидов), поэтому гены В и С должны транслироваться в одной и той же
рамке считывания.
B. Как показано на рис. 5-57, мутационные изменения в генах К и В
связаны с заменой кодона треонина (АСА) на кодон аргинина (AGA) в гене А.
Ген С при этом не изменяется.
Литература: Sanger, F. et al. The nucleotide sequence of
bacteriophage фХ174. J. Mol. Biol. 125, 225-246, 1978.
Клонирование ДНК и генная инженерия
5-46
A. рестрицирующие нуклеазы; рестрикционные фрагменты (рестрик-ты)
Б. векторы клонирования
B. клон
Г. клон геномной ДНК; библиотека геномной ДНК Д. библиотека кДНК Е.
субтрактивная гибридизация Ж. "прогулка по хромосоме"
3. гибридизационная селекция И. экспрессирующие К. комбинированный
белок Л. трансгенные
М. полимеразная цепная реакция
5-47
А. Правильно. (Например, рестрицирующая нуклеаза Smal разрезает
Основные генетические механизмы 307
последовательность GGGCCC и комплементарную ей область другой цепи
