Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Миелопоэз
В условиях погружных культур костного мозга; в плазменном сгустке, в камере Jayne и Pulvertaft, в которой эксплантат помещают в капле среды на питательный агар, а также при использовании культуральных камер других типов, миелоидные клетки сохраняются в течение нескольких дней — недели. По данным Rasmussen (1933), миелобласты в культурах костного мозга молодого кролика в первые дни после эксплантации размножаются и иногда превращаются в миелоциты. А. А. Максимов (1916) считал, что миелоциты могут митотически делиться в течение 5 дней без прогрессивной дифференцировки.
Относительно того, возможно ли дальнейшее созревание миелоцитов в условиях погружных культур, имеются противоречивые мнения. Так, по данным Lajtha с соавторами (1965), миелоциты в жидкой питательной среде созревают до зрелых сегментоядерных лейкоцитов в течение 24 часов. Другие исследователи считают, что миелоциты в погружных культурах не дифференцируются в более зрелые формы (Pulvertaft, Humble, 1956),
Нейтрофильные сегментоядерные лейкоциты, содержащиеся в исходном материале, в течение нескольких дней
обнаруживают подвижность в различных типах тканевых культур (Thomas, 1956; Woodliff, 1958, 1964). Многие из этих клеток вскоре после эксплантации претерпевают дегенеративные изменения. Базофильные сегментоядерные лейкоциты могут сохраняться в погружных культурах до 4 дней.
В агаровых культурах суспензии кроветворных клеток на соответствующих подложках или с использованием кондиционированных сред развиваются очаги двух типов: состоящие из миелоидных элементов и мононуклеарных форм (Pluznik, Sachs, 1965, 1966; Bradley, Metcalf, 1966, и др.). Кроветворные клетки сохраняют специфическую дифференцировку и пролиферативную активность в течение 10— 14 дней. Как было показано при исследовании хромосомных маркеров, каждая колония представляет собой клон, т. е. происходит из одной клетки-предшественника.
По мере культивирования очаги миелоидных элементов замещаются очагами мононуклеарных клеток, т. е. макрофагов и гистиоцитов. Обращает на себя внимание, что в агаровых культурах, кроветворной ткани, эритроидного, мегакариоцитарного и лимфоидного ростка кроветворения, как правило, не обнаруживается.
Хотя количество клеток-предшественников для колоний на агаре коррелирует с числом клеток, образующих колонии в селезенках мышей (Wu, Siminovitch, Till McCulloch, 1968) и метод агаровых культур может быть использован для оценки стволового потенциала костного мозга человека (Senn, Till, Siminovitch, McCulloch, 1967), клетки-предшественники для колоний в агаровых культурах и в селезенке нельзя отождествлять. Клетки, образующие очаги на агаре, являются, вероятно, коммитированными предшественниками миелоидного ряда дифференцировки, способными к са-моподдержанию в течение лишь ограниченного времени (Wu a. oth., 1968).
В органных культурах, представленных по методу Wolff и Haffen (1952), миелоидное кроветворение продолжается в течение 10— 12 дней (Pourreau-Schneider, 1962, 1963).
При использований органных культур кроветворной ткани на миллипорных фильтрах (Е. А. Лурия и др., 1969, 1971) срок поддержания миелоидного кроветворения во многом определяется объектом, выбранным для эксплантации.
В культурах печени мышиных эмбрионов, поставленных по этому методу, миелопоэз поддерживается до 25 дней.
На основании изучения клеточного состава популяции кроветворных клеток можно прийти к заключению, что в данных условиях происходят наряду с интенсивной пролиферацией дифференцировка и созревание миелоидных элементов.
Однако этот процесс, вероятно, отличается рядом особенностей от того, который протекает в условиях организма. Характерно, что в отдаленные сроки культивирования уменьшается число незрелых форм и увеличивается количество дифференцированных.
По данным, полученным с использованием Н3-тимидина, в культурах происходит пролиферация миелоидных клеток, по крайней мере до 3 недель. При этом в культурах сохраняется высокий объем пролиферативного пула. Кроме того, в культурах происходит созревание пролиферирующих клеток и образование из них неделящихся элементов миелоид-ного ряда. В органных культурах костного мозга человека миелоидное кроветворение поддерживается не менее 18 дней (Е. А. Лурия и др., 1971). При использовании Н3-ти-мидина оказалось, что при этом происходит активное размножение и дифференцировка миелобластов — миелоцитов и созревают сегментоядерные лейкоциты. Кроветворение в этих культурах носит отчетливый промиелоцитар-ный характер. На подложке из предварительно выращенной остеогенной ткани кроветворение, носящее миелоидный характер, поддерживается более 2 недель. Таким образом, в органных культурах на мил^ипорных фильтрах длительно поддерживаются основные эггапы дифференцировки мие-лридных клеток.
В погружных культурах костного мозга мегакарио-циты в течение короткого времени способны образовывать кровяные пластинки-тромбоциты (Thiery, Bessis, 1956; Pulvertaft, Humble, 1956). В культурах костного мозга мышей и крыс уже через 5 часов эксплантации в цитоплазме мегакариоцитов появляются многочисленные длинные полосы, которые затем распадаются на кровяные пластинки. Низкое содержание кислорода активирует тромбоцито-генез (Pulvertaft, 1958).
