Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Кроветворные клетки в культурах эмбриональной печени активно пролиферируют, на что указывает не только высокий митотический индекс, но и интенсивное включение в них Н3-тимндина (рис. 13) (Е. А. Лурня и др., 1970).
Нэ-тимидин вводили в питательную среду на -1 18-й
день культивирования в концентрации 1 мккюрн/мл и через 1 24 часа из культур делали отпечатки. На отпечатках
просчитывался процент меченых и немеченых клеток миело* идного ряда: миелобластов—миелоцитов, мета миелоцитов, палочкоядерных и сегментоядерных лейкоцитов. Выяснилось, что с 5-го по 19-й день кроветворная ткань в эксплантатах проявляет высокую пролиферативную активность. За 24 часа культивирования на среде, содержащей И3-тнмиднн, (Происходит включение метки в 100% миелобластов, промиелоцитов. миелоцитов и метамиелоцитов. Доля меченых палочкоядерных лейкоцитов составляет 71—79%, а сегментоядерных лейкоцитов колеблется от 50 до 73%. Индексы метки среди отдельных категории миелоидных клеток в 7-дневных культурах эмбриональной печени в зависимости от времени экспозиции с Н3-тимиднном приведены в табл. 3.
Рис. 13. Включепс Нятнмнднна о миелиндине клетки ь И дневной культуре эмбриональной печени.
Формула миелоидного кроветворения 7-дневных культур эмбрнотльной печени и изменение индекса метки при введении Н -тимидина в питательную среду на 1,3, 7'/^, 19 и 24 часа (по Е. А. Лурии и др., 1971)
Индекс метки
Мполон гные клетки Формула 1 час 3 часа 7' , часов 19 24
К часоо часа
Миелобласты---миело 35 54 65 91 100 100
циты ........
Мстамислоцнты .... 13 30 53 73 90 100
Палочкоядерные .... 40 0 0 7 64 79
Сегментоядерные . . . 12 0 0 0 24 51
Следует отмстить, что метамиелоциты входят в пролиферативный пул. Об этом свидетельствует тот факт, что за первый час культивирования в присутствии Н3-тнмидина значительная часть мета миелоцитов (30%) окалывается меченом. Однако псе митозы, обнаруженные п отпечатках этого срока, метку пе содержали. Способность мета миелоцитов к пролиферации была обнаружена нами и в более длительных культурах.
Наблюдение, что за 19 часов в 7-дневных культурах мечеными оказываются все миелобласты, промпелоциты и миелоциты, показывает, что в органных культурах продолжительность жизненного цикла у всех этих клеток составляет менее 19 часов.
Первые меченые палочкоядерные лейкоциты появляются в культурах через 7 часов после введения Н3-гнмиднна. H;i основании этого можно заключить, что время созревания от метамиелоцита до палочкоядерного лейкоцита составляет, очевидно, около 7 часов. По тем же соображениям время дифференцировки от метамиелоцита до сегментоядерного лейкоцита составляет более 7*/г н менее 19 часов. В целом приведенные результаты свидетельствуют об интенсивной пролиферации и дифференцнровке миелоидных клеток в условиях органных культур.
Таким образом, в условиях органных культур кроветворная ткань эмбриональной печени может в течение длительного времени продолжать свою пролиферацию и диф-ференцировку. Вероятно, поддержание кроветворения в культурах обусловлено контактом кроветворной ткани с эмбриональной печеночной паренхимой. Есть основания
предполагать, что печеночная строма оказывает на кроветворные клетки специфические гистогенетические воздействия. Однако данные, характеризующие механизм этих влияний, пока отсутствуют.
При изучении культур эмбриональной печени удалось уловить корреляцию между синтезом специфического сывороточного белка печеночными клетками и продолжительностью кроветворения (Е. А. Лурия, Р. Д. Бакиров, Г. И. Абелев, А. Я. Фриденштейн, 1969). Речь идет о синтезе эмбрионального сывороточного белка a-f-глобулина, который синтезируется и секретируется паренхиматозными печеночными клетками. Нет прямых указаний на то, что секреция a-f-глобулина является фактором, регулирующим эмбриональное кроветворение, однако имеются данные, что между этими двумя процессами существует тесная взаимосвязь.
Определение a-f-глобулина проводилось микрометодом двойной диффузии в геле с помощью тест-системы на a-f-глобулин (Г. И. Абелев, С. Д. Перова и др., 1963), состоящей из кроличьей антисыворотки к сыворотке новорожденных мышей, истощенной плазмой взрослых мышей, и из сыворотки новорожденных мышей. Оценка силы реакции проводилась путем сравнения полученных полос преципитации со стандартной шкалой двукратных разведений антигена. Аналогично проводились определения сывороточного альбумина в среде. В качестве тест-системы использовались кроличья антисыворотка к сыворотке взрослых мышей и очищенный альбумин, взятый в оптимальном разведении.
Кроме того, при использовании метода иммуноавторадиографии (Г. И. Абелев, Р. Д. Бакиров, 1967) было определено включение меченых аминокислот в a-f-глобулин и альбумин в культурах. В питательную среду культур вводили раствор С14-глицина в концентрации 2 мккюри/мл. После 2-дневной инкубации с меткой культуральная среда концентрировалась, а затем ставилась преципитация в агаре по обычной методике. Агаровые пластинки отмывали, высушивали и экспонировали на пленку.
