Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Число колоний в агаровых культурах костного мозга коррелирует с количеством стволовых клеток в исходной взвеси (Wu a. oth., 1968). Это было показано в экспериментах с параллельной эксплантацией in vitro и трансплантацией in vivo облученным мышам суспензии кроветворных клеток. Сравнивались подсчеты количества колоний в культуре и количество кроветворных очагов в селезенке (модель Мак Куллока и Тилла). Как известно, кроветворные колонии в селезенке являются клонами, т. е. каждая колония происходит из одной родоначальной клетки. То же было показано и для колоний в культурах путем хромосомного анализа метафазных пластинок, входящих в состав колонии. Оказалось, что все метафазные пластинки, входящие в одну колонию, характеризуются своей хромосомной аномалией, т. е. содержат общий хромосомный маркер, хотя исходная взвесь, использованная для культивирования, представляла собой смешанную популяцию, лишь часть элементов которой содержала маркер.
В дальнейшем было установлено, что клетки, обеспечивающие колониеобразование в агаровых культурах, явля-
ются коммитированными миелоидными предшественниками, а не стволовыми клетками (Wu a. oth., 1968). Эти предшественники отличаются от стволовых кроветворных клеток по ряду свойств: по осаждению при градиентном центрифугировании, по чувствительности к винбластину, по изменению количества после введения адьюванта, по степени самоподдержания и др. (Haskill a. oth., 1970; Moore
a. oth., 1970). Метод клонирования в агаре позволяет проводить количественный учет содержания миелоидных предшественников в различных популяциях кроветворных клеток и изучать изменение их количества в кроветворной ткани при воздействиях, выводящих эту ткань из равновесного состояния.
Даже при введении эритропоэтина в агаровых культурах не удается получить эритроидных колоний. Однако такие колонии возникают при культивировании клеток эмбриональной печени в плазменном геле при введении, кроме обычной кондиционированной среды (из-под культур почечных трубочек), еще и эритропоэтина (Stephenson a. oth., 1970). При этом образуются как миелоидные, так и эрит-роидные колонии. Если обычная кондиционированная среда исключалась, то развивались только эритроидные колонии, но их число при этом не увеличивалось. Наоборот, в случае культивирования с кондиционированной средой, но без эритропоэтина, образовывались только миелоидные колонии и их количество также не возрастало. Это еще раз показывает, что образование колоний в культурах происходит не за счет стволовых клеток, которые могут дифференцироваться и в миелоидном, и в эритроидном направлении, а из коммитированных предшественников. Что касается стволовых клеток, то их количество в агаровых культурах резко падает уже в первые дни культивирования и через 4 дня они практически исчезают (см. главу II).
5. ОРГАННЫЕ КУЛЬТУРЫ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ
Эмбриональная печень
Результаты органного культивирования эмбриональной печени во многом зависят от состава питательно^ среды и от использованного метода эксплантации.
В агаровых культурах эмбриональной печени человека наблюдается гибель кроветворных элементов начиная с 4-го
39
дня эксплантации; одновременно с этим в эксплантатах развиваются такие сложные паренхиматозные структуры, как желчные протоки и цисты (llillis. Bang, 1962). При использовании метода Wolff и Ilaffen в культурах эмбриональной печени мыши кроветворение поддерживалось около 10 дней (Gallien-Lartique, 1966. 1967).
В этих условиях отмечается прекращение эрнтроидного кроветворения через несколько дней после эксплантации Образование мнелоидных форм в культурах наблюдается и п отсутствие эритропоэза. Активацию эрнтроидного кроветворения можно получить при введении в питательную среду плазмы от анемичных животных (Gallien-Lartique, 1966, 1967). Митозы в очагах эритропоэза наблюдаются в таких культурах в течение 5 дней, затем происходит угасание эрнтроидного кроветворения.
Использование метода органных культур на мнллнпор-ных фильтрах в модификации, предложенной нами, позволило получить не только днфференцнровку паренхиматозной ткани in vitro, но и длительное кроветворение. Фрагменты печени мышиных эмбрионов культивировали на миллипорных фильтрах AUFS (0.6 0,9 мк) на среде 199, содержащей бычью сыворотку, куриный эмбриональный экстракт, глюкозу, витамин С, 1-глютамнн, Na-p-глнцеро-фосфат (Е. А. Лурия и др., 1969).
В 3-дневных культурах фрагментов печени 16 20 дневных эмбрионов наблюдаются дегенерация ткани в центре эксплантата и сохранение эпителиальных пластов, мнело-ндных, эритроидных клеток и мегакарионитов в периферических участках. Вокруг кусочка на фильтре происходит рост эпителиальных мембран с выселившимися кроветворными элементами. Па нижней поверхности фильтра наблюдается рост гистиоцитов.
На 6-й день кусочки окружены широкими эпителиальными мембранами с многочисленными клетками в состоянии митоза. Периферическую зону эксплантата снимают обширные поля кроветворения, содержащие клетки миело-идного, эрнтроидного и мегакарноцитарного ряда, расположенные среди эпителиальных клеток.
