Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Лурия Е.А. -> "Кроветворная и лимфоидная ткань" -> 13

Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.

Лурия Е.А. Кроветворная и лимфоидная ткань — М.: Медицина, 1972. — 158 c.
Скачать (прямая ссылка): krovetvornayailimftkan1972.djvu
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 68 >> Следующая

В последующем другие авторы показали, что клетки костного мозга мышей образуют колонии миелоцитов и макрофагов при использовании в качестве подложки клеток
трипсинизированной почки 8-дневных мышей (Bradley, Metcalf, 1966). Оказалось, что подходящую кондиционированную среду продуцируют только культуры трипсинизиро-ванных почек мышат и клеток эмбриона, в то время как среда из-под других культур (легкого, головного мозга, взвеси клеток тимуса, селезенки, печени) не давала эффекта (Bradley, Sumrcer, 1968).
Таким образом, образование колоний миелоидных клеток и макрофагов наблюдается при культивировании суспензии кроветворной ткани на соответствующих фидерах или при использовании кондиционированной среды.
Методики, предложенные Pluznik и др. (1965) и Bradley и Metcalf (1966), имеют много общего. Они основаны на применении культуральной среды, состоящей из двухслойного агара. Нижний слой 0,5% агара содержит трипсинизиро-ванные клетки фидера, верхний слой 0,3% агара — суспензию кроветворных клеток. Основным компонентом питательной среды являлась среда Игла, к которой добавляли различные дополнительные вещества и сыворотку. Культивирование проводится в атмосфере 5—10% углекислого газа в воздухе. Методики, применяемые этими исследователями, отличались рядом технических подробностей: размером пластиковых чашек для культур, клеточной плотностью, применяемыми сыворотками, способами получения и введения кондиционированной среды.
При использовании подложек, состоящих из живых клеток, наблюдается ряд особенностей в составе и развитии колоний. Так, на подложке из почечных клеток клетки костного мозга образуют колонии, заметные уже на 2-й день и достигающие максимальных размеров на 7—10-й день культивирования. Эти колонии являются наиболее крупными. Наибольшее количество элементов, входящих в состав колонии, составляет 2—4 тысячи клеток. В основном это элементы миелоидного ряда с примесью макрофагов. В последующем наблюдается преобладание макрофагальных форм и образование чисто макрофагальных колоний, однако формы миелоидного кроветворения обнаруживаются до 14-го дня культивирования (Bradley, Metcalf, 1966; Metcalf a. oth., 1967).
Стимулирующей колониеобразование активностью обладает фидер из почек новорожденных, 2—8—14-дневных мышат. Активность падает с увеличением возраста донора. На подложке из почечных клеток 14-дневных мышат на 106 клеток костного мозга образуется 400—500 колоний, а если
возраст донора составляет 2 месяца, то в среднем 340 колоний. Клетки почки 3-месячных мышей способствуют образованию в среднем 45 колоний на 1 млн. ядерных клеток костного мозга. В культурах костного мозга без подложки колонии не образуются.
В культурах диссоциированных клеток селезенки на фидере из клеток трипсинизированного эмбриона на 10-й день культивирования колонии достигают своего максимального размера; они состоят в среднем из 1200—1300 элементов. На этом уровне количество клеток в колонии сохраняется до 17 дней. Большинство колоний, наблюдаемых на 3— 10-й день и в последующие сроки, состоят из активно фагоцитирующих макрофагов (Pluznik, Sachs, 1965).
При использовании кондиционированных сред получены несколько отличающиеся результаты, хотя и в этих условиях удавалось получить колонии миелоидных клеток и макрофагов (Pluznik, Sachs, 1966; Bradley, 1968; Bradley, Sumner, 1968). Кондиционированную среду Bradley и Sumner получали из монослойных культур трипсинизированных почек 8-дневных мышей и при культивировании диссоциированных клеток 16—18-дневных мышиных эмбрионов. При введении кондиционированной среды из-под почечных клеток в агаровых культурах образовалось большее количество колоний с миелоидной дифференцировкой, чем при использовании среды второго типа. Оптимальными условиями для образования кондиционированной среды являлось культивирование 20 ХЮ6 клеток в 5 мл среды в течение 6 дней. В агаровые культуры костного мозга вводили по 0,5 мл кондиционированной среды. В культурах наблюдалось формирование колоний двух типов: 1) очагов, состоящих из клеток миелоидного ряда, включая метамиелоциты с кольцевидным и подковообразным ядром; 2) колоний, преимущественно состоящих из мононуклеаров. В процессе куль-тивкрования колонии макрофагального типа становятся преобладающими.
Активность кондиционированной среды не падает при диализе. Фактор, содержащийся в кондиционированной среде, устойчив к нагреванию; он выдерживает 50—80° в течение 30 минут (Bradley, Sumner, 1968).
Интересно отметить, что продуцировать кондиционированную среду могут клетки мышиного эмбриона, облученные 4000 р (Pluznik, Sachs, 1966). По данным этих авторов, фактор (факторы), обусловливающий образование колоний, является термостабильным, выдерживает длительное нагре-
вание (7 дней при 37°) без снижения активности, не инактивируется под действием рибонуклеазы, однако плохо переносит диализ. При 24-часовом диализе кондиционированной среды на холоду активность среды снижается почти в 2 раза. Устойчивость к нагреванию, следовательно, была подчеркнута теми и другими авторами. Расхождения в вопросе о действии диализа на активность среды, вероятно, связаны с различиями примененных методик.
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 68 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed