Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
В дальнейших экспериментах было показано, что способностью стимулировать колониеобразование в агаровых культурах костного мозга, помимо кондиционированных сред, обладает и ряд других факторов. Наиболее четко это продемонстрировано при добавлении к культурам костномозговых клеток сыворотки от мышей со спонтанной или перевивной лейкемией to сыворотки от лейкозных больных (Bradley, Metcalf, Robinson, 1967; Metcalf, Foster, 1967; Foster, Metcalf, 1968; Stanley a. oth., 1968).
Bradley, Metcalf, Robinson (1967) показали, что сыворотка крови мышей AKR со спонтанной лимфоидной лейкемией стимулирует образование колоний в суспензии клеток костного мозга мышей. В стимулированных культурах уже через 2 суток появляются микроколонии, а к 6-му дню культивирования обнаруживаются макроколонии, содержащие до 200 клеток. В последующие сроки скорость роста снижается. Максимального размера—600 клеток — колонии достигают к 10-му дню.
Цитологический анализ колоний показал, что на 2-е сутки колонии состоят из 4—12 крупных клеток с кольцевидным или подковообразным ядром, а также более мелких элементов с такой же формой ядра. Через 3 суток в колониях преобладают мононуклеарные формы макрофагального ряда, фагоцитирующие агар. На 5-й день происходит полное замещение миелоидных клеток макрофагами. В этот срок появляются округлые мононуклеары с размером ядра 4—5 мк.
Подобное воздействие оказывает на культуры сыворотка мышей с первичной лейкемией.
В контрольных культурах в первые 2 суток отмечались микроколонии, которые затем не увеличивались, большая часть из них по мере культивирования исчезала. В ряде случаев стимулирующий фактор был обнаружен в сыворотке здоровых мышей, но его активность значительно ниже (Metcalf, Foster, 1967). Изучение свойств данного фактора показало, что он термолабилен, устойчив к воздействию
эфира, ДНК-азы, РНК-азы и представляет собой недиали-зирующиеся молекулы. В электрофорезе он располагается в а-глобулиновой фракции (непосредственно после альбумина). Stanley и др. (1968) считают вероятным, что это вещество является белком или гликопротеином, обладающим специфической лейкопоэтической активностью.
Стимулирующий колониеобразование фактор присутствует также в моче здоровых людей. Колонии в обработанных культурах костного мозга на 7-й день инкубации состоят полностью из мононуклеарных элементов.
Костный мозг крысы не дает колоний на подложке из почки новорожденных крыс и мышей. Образование колоний было получено при введении в питательную среду сыворотки крысы. Наиболее эффективное стимулирующее воздействие оказывало одновременное введение крысиной сыворотки с другими сыворотками (телячьей или бычьей). При этом возникали крупные колонии, в которых до 6-го дня сохранялись миелоидные элементы, а в дальнейшем только монону-клеарные клетки (Bradley, Siemienowicz, 1968). Авторы предполагают, что мононуклеары представляют собой продукт трансформации миелоидных клеток.
Таким образом, колониеобразование, происходящее под действием различных стимулирующих факторов, содержащихся в сыворотках и моче, отличается от колониеобразо-вания на фидере. В первом случае срок существования миелоидных элементов короче, чем во втором, а колонии образуются более мелкие.
Методом агаровых культур можно изучать и колониеобразующую активность клеток костного мозга человека. Однако применение подложек и введение кондиционированных сред, стимулирующих образование кроветворных очаг гов из костного мозга и селезенки грызунов, не создают благоприятных условий для развития колоний из костного мозга человек^. При использовании подложки из клеток почки мыши количество элементов колониях из костного мозга человека не превышало 50. В дальнейшем оказалось, что стимулирующее действие на колониеобразование оказывает кондиционированная среда, полученная из культур клеток селезенки человека. Введение такой .среды в количестве 25% в нижний слой агара приводит к интенсивному образованию колоний миелоидных клеток, включающих в свой состав элементы миелоидного ряда дифференцировки от миелобласта до зрелого гранулоцита. Максимального размера колонии достигают через 12—14 дней после экс-
плантации. В среднем они содержат 103 клеток. Важно отметить, что кондиционированная среда из-под культур селезенки человека оказывает стимулирующее действие и на клетки костного мозга мышей, в то время как кондиционированная среда из-под культур селезенки мышей оказывает стимулирующее воздействие только на культуры костного мозга мыши, но не человека (Paran a. oth., 1970).
Постоянное присутствие в среде стимулирующих факторов необходимо не только для возникновения колоний, но и для поддержания пролиферации элементов, входящих в их состав. Так, если колонию 4—7-го дня инкубации целиком перенести на свежую питательную среду, содержащую 0,5 мл лейкемической мышиной сыворотки в 1 мл среды, то наблюдается более интенсивный рост, чем без пересева. В случае переноса колонии на среду, содержащую аналогичное количество сыворотки здоровых мышей, происходит уменьшение размера колоний (Metcalf, Foster, 1967). При пересеве диссоциированных клеток 3—7-дневных колоний на свежую питательную среду, содержащую лейкемическую сыворотку, наблюдается в течение некоторого времени мак-рофагальный рост. Часть мононуклеарных клеток дает мелкие колонии, которые образуются в результате дальнейшей пролиферации диссоциированных клеток. Гранулоцитарная дифференцировка при пассировании утрачивается.
