Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Этот вывод хорошо согласуется с линейной зависимостью, которая обнаруживается между количеством экс-плантированных клеток и числом образующихся в культуре колоний фибробластов. Такая зависимость имеет место, если количество эксплантированных клеток составляет от 105 до 107 на флакон емкостью 100 мл. Величина колониеобразующей единицы, т. е. то количество эксплантированных клеток, на которое приходится одна колония, составляет около 105 ядерных клеток для костного мозга морской свинки и человека. Другими словами, концентрация клеток, образующих колонии фибробластов и выявляемых в условиях монослойных культур, составляет 10~5.
Представляется вероятным, что не все колониеобразующие клетки, т. е. предшественники фибробластов, дают колонии в условиях культур, поэтому их фактическая концентрация в костном мозге и селезенке, очевидно, выше, чем выявляется in vitro (Р. К. Чайлахян, А. Я. Фриденштейн, А. В. Васильев, 1970).
Еще одно свидетельство клональной природы колоний фибробластов в культурах костного мозга было получено при использовании метки Н3-тимидином (И. В. Кейлис-Борок и др., 1971). Если в момент, когда клетки-предшест-венники для колоний проходят в культурах свой первый синтетический период (что соответствует 28—60 часам культивирования), в течение некоторого времени присутствует Н3-тимидин, а затем культивирование продолжается с добавлением холодного тимидина, то часть колониеобразующих клеток окажется меченой, а другая часть содержать метку не будет. В случае, если каждая колония является клеточным клоном, одни колонии должны оказаться целиком мечеными, другие — целиком немечеными; смешанные колонии, состоящие из меченых и немеченых клеток, должны составлять лишь исключение, зависящее от случайного объединения нескольких колониеобразующих клеток. Результаты, которые удалось получить, определенно свидетельствуют о клональной природе колоний фибробластов:
из 97 колоний 94 состояли целиком либо из меченых, либо из немеченых клеток.
Клетки-предшественники для колоний фибробластов, возникающих в культурах, находятся в исходном костном мозге вне пролиферативного пула. Они постепенно входят в S-период спустя 28 часов после эксплантации. Действительно, при введении в культуры костного мозга Н3-тимиди-на на первые 4—72 часа с дальнейшим культивированием на среде с холодным тимидином оказалось, что индекс метки фибробластов, появляющихся в 3—5-дневных культурах, зависит от продолжительности того первоначального периода, в течение которого культуры велись на среде с Н3-тими-дином (И. В. Кейлис-Борок и др., 1971). Если Н3-тимидин присутствовал в среде не дольше первых 28 часов, фибробласты оставались немечеными, хотя значительная часть гистиоцитов в таких культурах содержала метку. Если Н3-тимидин находился в среде в течение первых 31 часов и дольше, то индекс метки фибробластов был 30% и выше. При этом повышение индекса метки соответствовало удлинению срока контакта культур с Н3-тимидином. Максимум метки (98%) достигается при культивировании в присутствии Н3-тимидина в течение. 60 часов. Эти данные показывают, что включение метки в клетки-предшественники для фибробластов не происходит в первые 28 часов культивирования и что клетки-предшественники вступают в пролиферативный пул постепенно после 28 часов. Важным условием для вступления клеток-предшественников в состояние пролиферации оказалось их прикрепление к поверхности субстрата. При инкубации взвешенных в среде клеток костного мозга в присутствии Н3-тимидина в течение даже 2 суток фибробласты метку практически не содержали (И. В. Кейлис-Борок и др., 1971). Отмеченное свойство существенно отличает клетки-предшественники для фибробластов от клеток-предшественников для гистиоцитов. Их пролиферация начинается с момента эксплантации, а максимум пролиферативной активности в эксплантатах костного мозга приходится на первые сутки культивирования.
Клетки-предшественники для фибробластов оказались высокорадиочувствительными. При облучении in vitro исходной взвеси клеток костного мозга человека уже в дозе 600 р с последующей эксплантацией в монослойные культуры образование колоний фибробластов полностью подавлялось (А. Я. Фриденштейн и др., 1971).
Близкая степень радиочувствительности характеризует и клетки-предшественники для фибробластов в костном мозге морских свинок и мышей (Г. Н. Кузьменко и др., 1971).
Имеются данные, которые указывают на резкие сдвиги в концентрации клеток-предшественников для фибробластов в костном мозге в результате воздействий, выводящих кроветворную ткань из равновесного состояния, в частности при сублетальном рентгеновском облучении и при кровопотере. Если костный мозг морских свинок или мышей эксплантиро-вать сразу после облучения в дозе 150 р, то количество клеток-предшественников для фибробластов в нем оказывается
пониженным не более чем на 10%. То же справедливо и для селезенки таких животных. Однако через 5 и 10 суток после облучения количество клеток-предшественников для фибробластов в костном мозге мышей и морских свинок уменьшается в десятки раз; наоборот, в селезенке облученных мышей на 5—20-е сутки после облучения 150 р число клеток-предшественников для фибробластов оказывается повышенным в 5—10 раз (Г. Н. Кузьменко и др., 1971; И. А. Рудаков и др., 1971).
