Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Таким образом, число клеток-предшественников для колоний фибробластов, выявляемое в монослойных культурах костного мозга и составляющее относительно постоянную величину у нормальных животных, резко изменяется под влиянием воздействий, выводящих кроветворную ткань из равновесного состояния. Это может свидетельствовать о существенной роли, которую данные клетки играют в процессах кроветворения.
Фибробласты из культур костного мозга легко снимаются со стекла под действием трипсина и пассируются. Концентрация колониеобразующих клеток уже после первого пересева увеличивается почти в 100 раз (рис. 8). Путем многократного пассирования легко получить большие количества таких фибробластов.
9
Рис. 8. Схема возрастания эффективности колониеоб-разования при пассировании клеток монослойных культур костного мозга.
3. СУСПЕНЗИОННЫЕ КУЛЬТУРЫ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ
Метод суспензионных культур в его различных модификациях сводится к тому, что при постоянном вращении, встряхивании, помешивании или продувании газовой смеси через среду клетки удерживаются во взвешенном состоянии и не прикрепляются к поверхности культурального сосуда. Для культивирования клеток костного мозга и крови метод суспензионных культур не открыл пока перспектив длительного поддержания дифференцировки in vitro. Нормальная морфология клеток костного мозга сохраняется в культурах недолго (12—24 часа), в последующем наблюдается прекращение кроветворения и прогрессивное созревание гемопоэ-тических элементов (Lau a. oth., 1967).
Метод суспензионных культур позволяет учитывать абсолютное количество клеток в процессе культивирования путем последовательного забора проб. В настоящее время наиболее распространен метод культивирования костного мозга в вакцинных сосудах, в которые наливают суспензию клеток костного мозга в питательной среде, содержащей 30—60% сыворотки и глюкозу.
Ввиду того что время поддержания кроветворения в условиях суспензионных культур ограничено несколькими сутками, данный метод может быть использован для проведения кратковременных опытов, целью которых служит изучение некоторых механизмов регуляции гемопоэза, особенностей метаболизма кроветворных клеток, а также цитологический и авторадиографический анализ кроветворной ткани. В суспензионных культурах костного мозга проведено, в частности, изучение синтеза гемоглобина по включению радиоактивного железа и влияния эритропоэтина на эритропоэз (С. Ю. Шехтер, 1965).
С помощью метода кратковременных суспензионных культур в сочетании с авторадиографией были получены важные результаты, использованные для построения моделей пролиферации и созревания кроветворных клеток (в том числе и у человека). Время созревания миелоидных и эри-троидных форм костного мозга, определенное в условиях суспензионных культур, соответствует параметрам гемопоэза в условиях целого организма. Среднее время дифференцировки от миелоцита до сегментоядерного лейкоцита в суспензионных культурах костного мозга человека составляет 48—50 часов, а время созревания от эритробласта до нор-
мобласта — 48 часов (Г. И. Козинец, 1962). Рассмотрение этих результатов, представляющих большой интерес для составления моделей гемопоэза, выходит за пределы темы данной работы. Соответствующие материалы изложены в ряде обзоров, к которым мы отсылаем читателей (Г. И. Козинец, 1962; Lajtha, 1965; Bond a. oth., 1971, и др.).
4. ОБРАЗОВАНИЕ КРОВЕТВОРНЫХ ОЧАГОВ
В АГАРОВЫХ КУЛЬТУРАХ IN VITRO
В 1965 г. Pluznik и Sachs предложили методику получения колоний из суспензии клеток селезенки при культивировании в агаре на подложке из клеток мышиного эмбриона. В культурах развивались два типа очагов: одни, состоящие из крупных элементов с метахром этической зернистостью, другие, содержащие нейтрофильные гранулоциты. Клетки с метахром этической зернистостью были описаны авторами как тучные клетки. Однако в последующем данные электронномикроскопического анализа показали, что эти клетки представляют собой макрофаги, содержащие фагоцитированные частицы агара. Они имеют неровную поверхность и ядра разнообразной формы. На клеточной поверхности обнаруживаются микроворсинки, а в цитоплазме — большое количество включений и вакуолей, которые содержат аморфный материал. Шероховатый и гладкий эндоплазмати-ческий ретикулум присутствует в определенных участках, митохондрии многочисленны, аппарат Гольджи хорошо развит.
Образование колоний макрофагов и нейтрофилов было получено из клеток селезенки взрослых мышей и из эмбриональной печени при культивировании в агаре, на подложке из клеток мышиного эмбриона или при использовании кондиционированной среды (Pluznik, Sachs, 1966; Ichikawa, Pluznik, Sachs, 1966). Кондиционированная среда вырабатывалась при культивировании 106 клеток мышиного эмбриона в монослойных культурах в 100-миллиметровых чашках в течение 7 дней. Добавление 25% кондиционированной среды к агаровым культурам клеток селезенки вызывало образование колоний, аналогичных тем, которые развивэ-ются при культивировании на подложке из клеток эмбриона (Pluznik, Sachs, 1966).
