Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
43. Lasnitzki I., Misuno T. (1979). J. Endocrinol., 82, 171.
44. New D. A. Т., Coppola P. Т., Cockcroft D. L. (1976). J. Reprod. Fertil., 48, 219.
45. New D. A. T. (1983). In. Methods for Assessing the Effect of Chemicals-on Reproductive Functions, Vouk V. B., Sheehan F. J. (eds.), p. 277.
46. Cockroft D. L. (1980). Acta Morphol. Acad. Sci. Hung., 28, 117.
47. Fainstat T. (1968). Fertil. Steril., 19, 317.
48. Lasnitzki I. (1976). In. Organ Culture in Biomedical Research, Ball М.,
Monnickendamm М. E. (eds.), Cambridge University Press, Cambridge,
p. 241.
49. McMahon M. J., Thomas G. H. (1973). Br. J. Cancer, 27, 323.
50. Lasnitzki I., Whitaker R. H,, Withycombe J. F. R. (1975). Br. J. Cancer, 32, 168.
51. Hodges G. М., Hicks R. M„ Spacey G. D. (1977). Cancer Res 37, 3720.
52. Knowles M. A., Finesilver A., Harvey A. E., Berry R. Z., Hicks R. M. (1983). Cancer Res., 43, 374.
53. Lasnitzki I. (1968). Cancer Res., 28, 510.
54. Lasnitzki /., Goodman D. S. (1974). Cancer Res., 34, 1564.
55. Lasnitzki I. (1976). Br. J. Cancer, 34, 239.
56. Lasnitzki I., Bollag W. (1982). Cancer Treat. Rep., 66, 1375.
57. Lasnitzki I. Unpublished observations.
58. Doniach I., Pelc S. R. (1950). Br. J. Radiol., 23, 184.
ТЕСТЫ НА ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ И ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ
Э. Вилсон
1. Введение
Программы поисков новых химиотерапевтических средств включают в себя широкие предклинические испытания огромного количества химических соединений для выявления их противоопухолевой активности. Оценка безопасности таких веществ, как лекарства, косметические средства, пищевые добавки, пестициды и промышленные химические соединения, делает необходимой проверку еще большего круга веществ. Важную роль в таких исследованиях всегда играли лабораторные животные. Культуры клеток применялись главным образом при поисках противоопухолевых препаратов, ценность этих систем для оценки цитотоксичности и жизнеспособности в настоящее время не вызывает сомнения. Сейчас все более выявляется необходимость использования систем in vitro в обеих программах проверки химических срединений. Прежде всего такая необходимость обусловлена экономическими соображениями, поскольку системы проверки in virto оказываются дешевле систем in vivo. Вторым соображением в пользу систем in vitro является ограниченность применения результатов, полученных на животных, к человеку вследствие значительного количества видовых различий в метаболизме. И наконец, системы in vitro привлекательны с моральной точки зрения, поскольку они уменьшают количество экспериментов на животных.
Оценка безопасности химических соединений включает в себя широкий круг исследований их мутагенности, канцерогенно-¦сти, тератогенности и токсичности. Полное описание исследований в этих направлениях выходит за рамки этой главы. Мы остановимся лишь на проблеме острой токсичности, которая одинаково существенна при оценке применимости данного препарата в химиотерапии рака и при оценке безопасности химического соединения. Это вытекает из результатов многочисленных исследований в области химиотерапии рака за последние 40 лет. Модельные системы, использовавшиеся наиболее широко, вызывают большой интерес с точки зрения противоопухолевой активности и токсичности вообще.
Основные требования к обоим путям применения этих систем оказываются сходными. Во-первых, системы тестирования должны давать воспроизводимые и устойчивые зависимости
результата от концентрации в диапазоне концентраций лекарств, превышающих дозы, действующие in vivo. Во-вторых, выбранные критерии ответа должны линейно зависеть от числа кл'етокГ'И наконец, информация, получаемая на основе кривой доза—ответ, должна иметь прогностическое значение для действия того же самого лекарства in vivo.
2. Общие сведения
Использование систем in vitro стало основным методом скрининга возможных противоопухолевых соединений с самого начала клинической химиотерапии рака в 1946 г.; тогда было впервые обнаружено противоопухолевое действие азотистого иприта. В многочисленных обзорах приведена история развития этих методов и областей их применения [1, 2], а также современное состояние проблемы ГЗ—51. Ситуация с оценкой безопасности лекарств также рассмотрена в трудах симпозиума, проведенного недавно Обществом исследований человека {б).
Ранние исследования цитотоксичности носили главным образом качественный характер. Для изучения действия лекарства использовались эксплантаты ткани, растущие на химически неопределенной среде, и для придания результатам «количественного» оттенка использовались либо оценки морфологического повреждения, либо степень подавления процесса роста клеток из эксплантатов. Введение в практику полуопределенных культуральных сред, а также разработка методов выращивания отдельных клеток на стекле в форме монослоя позволили стандартизировать исследования и ввести достаточно обоснованную оценку клеточного ответа. Используя эту технику в сочетании с измерением количества белка в обработанных и необработанных клетках, Игл и Фоли смогли продемонстрировать четкую корреляцию между действием противоопухолевых препаратов in vitro и in vivo [7], что подтвердило пригодность метода. Система тестирования in vitro была впоследствии включена в программу скрининга Национального центра по химиотерапии рака (CCNSC; Cancer Chemotherapy National Service Centre). Этот метод оказался основным при предварительном скрининге в ходе очистки продуктов ферментации вследствие его простоты, необходимости малых количеств исследуемых соединений и низкой стоимости — все это не может быть обеспечено системами скрининга in vivo [3].
