Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
ж) Заключите в синтетическую смолу, например в DPX.
II. Результаты.
а) Ядра — голубые, темно-синие.
б) Хромосомы — темно-синие.
в) Ядрышки — красноватые.
г) Хрящевая ткань — светло-голубая, темно-синяя.
д) Базальная мембрана — розовая.
е) Цитоплазма — различные оттенки розового.
ж) Мышечные волокна, коллоид щитовидной железы, эластичные волокна — темно-розовые.
з) Коллаген и костная ткань — светло-розовые.
9.3.2. Окрашивание по методу йодная кислота — реактив Шиффа (реакция ШИК)
Этот метод используется для выявления полисахаридов (гликоген), нейтральных мукополисахаридов, мукопротеинов, гликопротеинов и гликолипидов.
Рис. 7.10. Предстательная железа взрослых мышей. Влияние 20-метнл-холантрена и обратимость его действия. 1 — Предстательная железа мыши, растущая в течение 3 нед в контрольной среде. Видны альвеолы, окаймленные одним слоем слизистого секреторного эпителия. Окраска ШИК после гидролиза диастазой. Увеличение 243Х- 2 — Гиперпласти-ческие альвеолы в предстательной железе мыши, обработанной в течение 11 дней канцерогеном, а затем инкубированной 10 сут в контрольной среде. Видны мелкие плотно расположенные клеткн; много делящихся клеток. Гематоксилин. Увеличение 304Х- 3 — Альвеолы в предстательной железе мышей, обработанной в течение 11 сут 20-метил-холантреном н затем инкубированной 10 сут с аналогом витамина А. Обратите внимание на отсутствие гиперплазии. Эпителиальная выстилка состоит из одного ряда цилиндрических клеток. Гематокси-лин-эозин. Увеличение 410Х.
1. Схема окрашивания.
а) После депарафинирования проведите срезы через серию спиртов со снижающейся концентрацией, вплоть до дистиллированной воды.
б) Окислите 1%-ной йодной кислотой в течение 15 мин.
в) Промойте 15 мин в проточной водопроводной воде и ополосните дистиллированной водой.
г) Проинкубируйте срезы в темноте в реактиве Шиффа в течение 10—20 мин.
д) Промойте 10 мин в проточной водопроводной воде.
е) Окрасьте ядра гематоксилином Майера в течение 10 мин. Гематоксилин Эрлиха в данном случае непригоден, так как окрашивает также некоторые ШИК-по-ложительные компоненты ткани.
ж) Обезводьте в серии возрастающих концентраций спирта по 2 мин в каждом разведении.
з) Осветлите последовательно в двух сменах ксилола по 2 мин в каждой.
и) Заключите в синтетическую смолу DPX.
II. Результаты.
а) ШИК-положительные вещества окрашиваются красным или фуксиново-красным; ядра окрашиваются голубым.
При проведении некоторых экспериментов оказывается необходимым исключить гликоген. Последний может быть удален путем инкубации срезов с диастазой перед окрашиванием, после чего протокол окрашивания несколько изменяется.
а) Перенесите срезы в дистиллированную воду.
б) Инкубируйте срезы с 1%-ной диастазой в течение 12 мин.
в) Ополосните дистиллированной водой.
г) Промойте срезы в проточной водопроводной воде
5 мин.
д) Перенесите на 15 мин в 1%-ный раствор йодной кислоты.
Остальные этапы — в соответствии с ппиведенным выше протоколом.
9.3.3. Азановое замещение
Этот метод окраски позволяет надежно дифференцировать эпителий, строму и хрящевую ткань; при этом выявляются базальные мембраны между эпителием и подлежащей стромой.
I. Схема окрашивания
а) Депарафинированные срезы проведите через серию спиртов с понижающейся концентрацией, вплоть до дистиллированной воды.
б) Поместите на 20 мин в квасцовый кармин.
в) Промойте дистиллированной водой в течение 1 мин.
г) Перенесите на 5 мин в 1%-ную фосфомолибденовую кислоту.
д) Промойте дистиллированной водой в течение 1 мин.
е) Перенесите на 10 мин в анилиновый голубой,
ж) Промойте 1 мин в дистиллированной воде.
з) Дифференцируйте в 96%-ном этаноле в течение 5 мин.
и) Проведите через абсолютный этанол (10 погружений), второй абсолютный этанол (2 мин), ксилол (5 мин) и второй ксилол (5 мин).
к) Заключите в синтетическую смолу DPX.
II. Результаты.
а) Ядра — красные.
б) Хромосомы — красные.
Рис. 7.11. Трахеи новорожденных крыс. Влияние конденсата сигаретного дыма и обратимость его действия. 1—Трахея, растущая 18 дней в контрольной среде. Эпителиальная выстилка состоит из цилиндрических реснитчатых клеток. Азановое замещение. Увеличение 379Х. 2 — Трахея, растущая 14 дней в присутствии конденсата сигаретного дыма с последующей инкубацией в контрольной среде в течение 4 сут. Клетки теряют жгутики, и эпителий состоит из большого числа плотно расположенных мелких клеток с высокой частотой делений. Азановое замещение. Увеличение 379Х. 3 — Трахея, растущая 14 дней в присутствии конденсата сигаретного дыма, а затем 4 дня в присутствии аналога витамина А. Эффекты конденсата отсутствуют. Азановое замещение. Увеличение 379Х-
Рис. 7.12. Радиоавтограф, демонстрирующий включение 3Н-уридина в клетки эпителия при доброкачественной гиперплазии предстательной железы человека. Ткань культивировали 7 дней в присутствии тестостерона. Увеличение 572 X.
