Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
ные)
Цисплатин Полная активность сохраняется 6 ч;
полная утрата к 48 ч
Фосфорамидный Полная активность сохраняется
иприт 24 ч; некоторая утрата к 48 ч
Мелфалан Полная активность сохраняется 1 ч;
полная утрата к 24 ч
Хлорамбуцнл 6-кратное снижение ИД50 после
24 ч
Мустны 25-кратное снижение ИД50 после
24 ч
ТиоТЭФ 1,38-кратное снижение ИД50 после [29]
24 ч
Циклофосфамид 3,5-кратное снижение ИД50 после
24 ч
Виибластин Отсутствие изменений ИД50 после
24 ч
1) Автор, видимо, ошиблась в интерпретации результатов [29]. Хлорамбуцил, мустин, тиоТЭФ и циклофосфамид частично деградируют в ходе иредынкубации, что приводит не к снижению, а к увеличению значений ИДго для этих соединений (на те же величины, которые приведены в таблице). — Прим. пер.
каждого лекарства на различные опухоли. Пр и использовании продолжительного периода воздействия следует помнить, что теоретическое значение СХТ равно истинному значению СХТ только в том случае, когда лекарство сохраняет полную активность при 37 °С в течение промежутка времени, равного полному периоду воздействия, и величина ответа пропорциональна времени воздействия. В табл. 8.2 приведены результаты определения стабильности растворов некоторых лекарств при 37°С. Эффективные концентрации лекарств могут снижаться также в результате их сорбции на поверхности сосудов для инкубации; это было отмечено в случае адриамицина и актиномицина D.
6. Восстановительный период
Наличие в испытании периода восстановления после действия лекарств существенно по трем причинам:
I. если действие лекарственного препарата оценивается по подавлению им клеточного метаболизма, то анализ периода восстановления может вскрыть нарушения метаболизма, не имеющие отношения к гибели клеток;
II. в течение этого периода могут репарироваться сублеталь-ные изменения;
III. может выявляться запаздывающая цитотоксичность (как, например, при действии 6-меркаптопурина и метотрексата).
Отсутствие в испытании периода восстановления может приводить либо к недооценке, либо к переоценке наблюдаемого уровня гибели клеток в зависимости от природы лекарства и от конечного результата испытания. Важно, чтобы период восстановления не был слишком продолжительным. В противном случае гибель клеток может маскироваться разрастанием резистентной популяции. При анализе количества клеток или включения предшественников клетки в монослое должны оставаться на логарифмической фазе роста в течение периода воздействия лекарства и восстановительного периода. В тестах на эффективность клонирования период восстановления представляет собой период роста клонов. Время, необходимое для образования видимых колоний, составляет в суспензионных тестах как минимум 5—6 генераций (32—64 клетки на колонию). В монослой-ных тестах этот период бывает обычно значительно более продолжительным.
7. Конечный результат
7.1. Цитотоксичность, жизнеспособность и выживаемость
Результаты исследования определяются тестами на цитотоксичность и тестами, в которых анализируется выживание клеток. В тестах на цитотоксичность определяют индуцированные лекарствами изменения в метаболических путях или структурной целостности, которые могут иметь и не иметь непосредственного отношения к гибели клеток. В тестах на выживание определяется конечный результат метаболических нарушений, которые могут приводить либо к восстановлению клеток, либо к их гибели. Теоретически единственным достоверным показателем выживаемости пролиферирующих клеток является способность их к дальнейшему размножению, что определяется клонированием клеток. В качестве показателя выживаемости могут быть
использованы и метаболические признаки, особенно когда клеточной популяции предоставляется время для метаболического ьосстановления после воздействия лекарства.
Иногда исследуемый препарат обладает неспецифической цитотоксичностью (то есть токсичностью, не влияющей непосредственно на размножение клеток); обработка таким соединением ведет к потере ряда клеточных функций, но не к потере репродуктивной способности. Тесты на цитотоксичность представляются в этой ситуации более приемлемыми.
7.2. Цитотоксичность и жизнеспособность
В некоторых тестах на цитотоксичность, таких как поглощение красителя мертвыми клетками или высвобождение 51Сгили флуоресцеина из предварительно меченых клеток, результаты можно получить немедленно. Эти испытания относятся к тестам на жизнеспособность и предназначены скорее для предсказания выживаемости, чем для ее прямого измерения. В целом такие тесты хороши для идентификации погибших клеток, но приводят к завышенным результатам при оценке длительного выживания. Результаты большинства из них отражают нарушение целостности мембран и необратимую гибель клеток.
