Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 8

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 122 >> Следующая

антител, их специфичности, титру и аффинности. Йз одной и той же
антисыворотки можно приготовить препарат, содержащий антитела к множеству
отдельных антигенов (полиспецифичность), антитела к небольшому числу
антигенов (олигоспецифичность) или антитела к одно-му-едннственному
антигену (моноспецифичность). Но даже в. этом, последнем случае реагент
не является гомогенным, поскольку индивидуальный иммуноген все же
представляет собой полидетерминантную структуру, стимулирующую
образование поликлональных, направленных к различным детерминантам
антител, причем нередко относящимся к разным изотипам. Кроме того, в ходе
гуморального иммунного ответа на индивидуальный эпитоп антитела
продуцируются многочисленными клеточными клонами, и таким образом за один
и тот же эпитоп могут конкурировать антитела с разной аффинностью.
Значение подобной гетерогенности одной сыворотки и между сыворотками
состоит в том, что каждая поликлональная сыворотка уникальна по составу
специфических антител, оптимальным условиям связывания с антигеном и
поведению в иммунологических реакциях. Поэтому в случае каждой отдельной
сыворотки приходится принимать решение относительно ее пригодности для
того или иного иммунологического теста. Если не производилась аффинная
очистка антисыворотки,, то специфические антитела составляют в ней (или в
иммуноглобулиновой фракции) в большинстве случаев не более 20-
Свойства антител и антигенов
23
30% общего количества иммуноглобулина. Это обстоятельство снижает
эффективность антисывороток в одних тестах и может привести к повышению
фоновых значений в других тестах.
В связи с поликлональной полиспецифической природой обычных антисывороток
их очистка до той степени специфичности, которая необходима для
дальнейшего использования с целью выявления тонких структур и антигенных
различий между молекулами на уровне индивидуального эпитопа, -
представляется непростой задачей, которую невозможно решить стандартным
путем.
6.2. Моноклональные антитела
В 1975 г. Келер и Милыптейн [1] предложили альтернативный способ
получения антител, представляющих собой моноклональные, моноспецифичные
продукты. Такие антитела образуются одной гибридной антителообразующей
клеткой, иммор-тализованной путем слияния с мнеломкой линией В-клеточно-
гордда- (образующиеся гибриды называют "гибридомами"). ¦Сбкретируемые
гибридомными клетками антитела гомогенны по специфичности, аффинности и
изотипу. Каждый моноклональный продукт специфичен по отношению лишь к
одной определенной антигенной детерминанте иммуногена, т. е. моноспе-
цифичен. Образуемые in vitro МКА преобладают (или оказываются
единственным белком) в культуральной среде. В принципе МКА любой
специфичности могут быть получены в неограниченном количестве, что
позволяет в настоящее время использовать в соответствующих тестах
универсальные стандартные реагенты. Область применения МКА быстро
расширяется, поскольку все большее число лабораторий убеждается в их
преимуществах и овладевает методами их получения. Целый ряд специфических
МКА уже можно приобрести коммерческим путем, хотя каталоги до последнего
времени обычно отражали лишь соответствующий интерес к этим антителам,
проявляемый иммунологами и микробиологами. В данных областях МКА в
качестве тест-систем используются уже очень широко. Их особая ценность
заключается в способности выбирать уникальное свойство антигена, которое
может, например, позволить определять и разделять клеточные популяции или
осуществлять анализ бактериальных антигенов. При исследовании различных
антигенов в растворе МКА, несомненно, могут способствовать решению
множества проблем, связанных со специфичностью и чувствительностью,
которые не могут быть решены с помощью поликлональных реагентов.
Моноклональные антитела способны значительно упростить многие (прежде
сложные в исполнении) тесты; они могут и
Таблица 1.1. Свойства методов, основанных на использовании антител
Принцип
Требования, предъявляе-
мые к антителам
Чувствительность1)
теста
Преимущества и недостатки метода
Методы преципитации
Двойная диффузия в геле (ДДГ)
Иммуноэлектрофорез (ИЭФ)
Двумерный ИЭФ
Ракетный иммуноэлектрофорез
Диффузия реагентов с образованием видимых преципитатов в геле
Электрофоретическое разделение АГ, диф фузия с образованием дуг
преципитации в геле
Электрофоретическое разделение АГ в двух направлениях; при этом второй
раз разделенные белки заставляют диффундировать в содержащем АТ геле с
образованием пиков преципитации
Электрофоретическая миграция АГ в содержащем АТ геле с образованием линий
преципитации, имеющих форму ракеты
Поликлональные, преци питирующие
Поликлональные, преци питирующие
Поликлональные, преци-питирующие, предпочтительно Ig-фракция:
очень эффективны антитела барана
" 10 мкг/мл АГ 5-20 мкг/мл АТ
Поликлональные, моно-специфические, преципи-тирующие
50-
20-
-100 мкг/мл АГ -100 мкг/мл АТ
Зависит от систем АГ-АТ
<5 мкг/мл АГ
Позволяет оценить степень сложности АГ, а также степень родства и
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 5 6 7 < 8 > 9 10 11 12 13 14 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed