Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 13

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 122 >> Следующая

. Хранение аликвот (-20 °С или ниже) с соответствующими пометками .
Контроль и пробное истощение образцов, затем - истощение всей сыворотки.
. Фракционирование иммуноглобулинов (разд. 10)
. Применение двухэтапиого метода (солевая преципитация и ионообменная
хроматография)
. Проверка чистоты фракции . Контроль активности фракции
. Выбор условий хранения в зависимости от вида животного.
. Аффинная очистка антител (разд. 10, см. также гл. 5)
• Проверка чистоты антигена
. Приготовление аффинной колонки с антигеном путем его химического
связывания с выбранным матриксом
в. Проверка антигенной активности колонки, ее емкости и условий элюции
антител
г. Пробная очистка. Контроль чистоты, активности и стабильности
элюируемых антител
Д. Очистка всей сыворотки с последующим хранением аликвот.
7. Контроль качества (разд. 11)
а. Исследование реагента с помощью методов, для осуществления которых он
предназначен, по возможности со стандартными антигенами
б. Калибровка по отношению к контрольному реагенту
в. Расчет концентрации антител, специфичных к определенному растворимому
антигену
г. Определение изотипа(ов) антител.
3*
36
Глава 2
нантам носителя, поэтому следует выбирать такой носитель, который в
дальнейших исследованиях не будет использован в качестве антигена и/или
легко может быть приготовлен в виде сорбента. На первый взгляд удачное
решение может заключаться в получении белков-носителей от животных того
же вида, что и иммунизируемое, однако этого делать не следует, поскольку
для формирования гуморального ответа на большинство (тимус-зависимых)
иммуногенов необходимо распознавание Т-хелперами антигенных детерминант
носителя. Необходимо помнить, что размер, заряд и полярные свойства гап-
тенов влияют на индукцию гуморального ответа, а сами эти свойства могут в
значительной степени зависеть от однородности и прочности связывания
гептена и белка-носителя, а также от природы самого носителя. Может
возникнуть необходимость в приготовлении и испытании конъюгатов с
различными носителями и с различными соотношениями гаптена и носителя, с
тем чтобы выбрать наиболее удачную конструкцию иммуногена. Как правило, к
более крупным гаптенам могут быть получены гаптен-специфические антитела,
однако они обычно, тоже гетерогенны. На пространственную ориентацию
гаптена существенное влияние оказывает способ связывания и конкретный
участок связывания в молекуле гаптена (см. разд. 3.1), от этого зависит
специфичность антител, которые обычно не направлены к участку связывания.
Антитела к меньшим по размеру гаптенам могут иметь специфичность и к
участку связывания. Может потребоваться конъюгация с использованием
линкера. В любом случае специфичность антител к гап-тену следует
проверять с помощью либо свободного гаптена (например, в
радиоиммунологичееком анализе или реакции торможения гемагглютинации),
либо гаптена, связанного аналогичным образом с другим носителем.
2.1.2. Крупные молекулы
Крупные молекулы за счет конформационной и структурной ригидности
представляют собой более сильные иммуногены, имеющие иммунодоминантные
участки и многочисленные разные антигенные детерминанты, что позволяет
получить пре-ципитирующие сыворотки. Тем не менее для достижения лучших
результатов все же рекомендуется использовать адъювант.
2.1.3. Чужеродность
Нельзя забывать о том, что молекула иммуногена должна быть воспринята
животным-реципиентом как чужеродная. Например, сывороточные белки
млекопитающих, в основном от-
Получение поликлональных антител и контроль их качества
37
Таблица 2.2. Основные свойства адъювантов
1. Усиление продукции антител путем увеличения эффективности презенти-
рования антигена и увеличение количества взаимодействующих н секре-
тирующих клеток при снижении оптимальной дозы иммуногена.
2. Увеличение иммуногенности, благодаря которому удается вызвать
образование антител в ответ на вещества с пограничными иммуногенны.ми
свойствами.
3. Изменение изотипического профиля секретируемых антител.
4. Продление гуморального ответа благодаря эффекту депонирования, что
препятствует резорбции иммуногена из места введения и тем самым снижает
потребность в повторных инъекциях.
5. Увеличение средней авидности и аффинности антител.
личаясь сложной структурой, представляют собой слабые иммуногены для
близкородственных видов, что обусловливает применение адъювантов для
стимуляции продукции антител при участии Т-хелперов (Т-зависимые
антигены). В ответ на иммунизацию белками близкородственных видов
образуются антитела, которые распознают только незначительные структурные
различия между соответствующими молекулами двух данных видов животных. В
некоторых случаях даже удается получить антитела к аллельным структурам,
различным у молекул одного вида. Наоборот, если источником иммуногена
является филогенетически отдаленный вид, полученные антитела обладают
широким спектром специфичностей. В особенности это касается антител к
сложным тимус-зависимым растворимым или связанным с клеткой антигенам
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed