Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 10

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 4 5 6 7 8 9 < 10 > 11 12 13 14 15 16 .. 122 >> Следующая

определяют количество связанного АГ Метод, основанный на использовании
меченного ферментом аитиглобулина: свя-
зывание АТ с твердофазным АГ определяется с помощью меченого
антиглобулина (получил название непрямого имму-ноферментного метода)
Меченый АГ конкурирует с исследуемым АГ за связывание с лимитированным
количеством АТ в жидкой фазе. Перед определением радиоактивности в
преципитате или супернатан-
Поликлональные или моноклональные, а также их комбинация в качестве
первых и вторых антител
Поликлональный, меченый антиглобулии
< 10 иг/мл АГ
Поликлональные (моно-специфические) или моноклональные; и те и другие
должны быть вы сокоаффиниыми
10 нг/мл АТ
< 10 фг/мл АГ (нмоль - пкмоль/л в случае гормо нов)
Двойная моноклональная система может нуждаться в антителах различной
специфичности. Потенциально метод очень чувствителен, поскольку
теоретически можно обнаружить даже одну связавшуюся молекулу АГ
Возможно разностороннее применение метода: титрование АТ, исследование
специфичности и изотипа образующихся в процессе иммунного ответа антител.
Лабораторная система скрининга МКА
Чрезвычайно чувствительный метод анализа, требующий строгой специфичности
АТ и их высокой аффинности. Необходима стадия отделения комплексов от
нссвязавшегося АГ. Требует дорогостоящего оборудования. Для мечения
необходим стандартный АГ. Радиационная опасность
Продолжение табл. 1.1
Принцип
Требования, предъявляе-
мые к антителам
Чувствительность1)
теста
Преимущества и недостатки метода
тод анализа для определения АГ в жидкой фазе
Иммунорадиомет-рический анализ (ИРМА)
Использование меченых АТ для количественного определения АГ или АТ
те отделяют преципитат
Метод, основанный на использовании радиоактивно меченных антител;
связывание АТ с твердофазным АГ ингибируется присутствием свободного АГ
Реакцию проводят в пластиковых пробирках или полистироло вых планшетах
Метод сандвича:
твердофазные АТ связывают АГ, а тот в свою очередь - вторые (меченые) АТ
метод количественного определения свя заниого АГ Тест с радиоактивно
меченным антиглобулином: связывание
АТ с твердофазным ЛГ определяется по связыванию меченого антиглобулина
Поликлональные или моноклональные АТ в качестве меченых АТ
< 10 мг/мл АГ, и в области пкг
Поликлональные или моноклональные, либо их комбинация в качестве первых и
вторых антител
Поликлональный радиоактивно меченный антиглобулин
<10 пкг/мл АГ
<10 иг/мл АТ
Тест проще, чем РИА; стадия отмывания заменяет отделение комплекса.
Необходимы меченые АТ, а также стандартный АГ для ингибирования
Проще, чем РИА; обладает той же чувствительностью. Двойная моноклональная
система может нуждаться в антителах различной специфичности
Метод количественного определения поликлональных или моноклональных
антител. Система лабораторного скрининга МКА, титрования АТ и определения
изотипа АТ в процессе иммунного ответа
Вестерн-блоттинг Идентификация и оценка степени чистоты АГ: специфичность
АТ
И ммуногистохими-ческие и иммуно-цитохимические методы
Флуоресцентный сортировщик клеток (FACS, от англ. fluorescence-activated
cell sorting)
АГ, разделенные в соответствии с размерами молекул путем электрофореза в
полиакриламидном геле, переносят на нитро-целлюлозную мембрану
(блоттинг); полосы, соответствующие А Г, выявляют с помощью меченых АТ
Для определения АГ: использование АТ, конъюгированных с флуоресцентной
или ферментной меткой, - часто в качестве второго антиглобулино-вого
реагента - для окрашивания клеток и тканей. В случае применения фермента
необходим нерастворимый, окрашенный субстрат
Для изучения и разделения клеточных популяций
Моноклональные или поликлональные АТ, связанные с ферментом или
радиоактивной меткой
При использовании в качестве первого слоя моноклональных (моно-
специфических) АТ значительно возрастает количество определяемых АГ
Как правило, моноклональные АТ - для флуоресцентных конъюгатов или в
качестве первого слоя; флуоресцентный поликлональный антиглобулин - в
качестве второго слоя
Метод позволяет оценить чистоту, молекулярный размер и природу АГ. Может
быть использован для определения и сравнения специфичности МКА
Использование системы фермент - субстрат позволяет готовить постоянные
препараты для обычной микроскопии. Альтернативные способы окрашивания
пригодны для исследований одновременно двух антигенов.
Иммунофлуоресценция (так же как и исследования с двойной меткой)
позволяет детально окрашивать клеточные структуры
FACS обеспечивает автоматизированный подсчет антителосвязывающих клеток с
оценкой размеров клеток и плотности маркеров. Усовершенствованные модели
позволяют проводить исследования с множеством красок (меток)
') Под чувствительностью метода здесь понимается минимально определяемое
количество аитнгеиа (АГ) нли антитела (АТ). Приведенные значения
приблизительны и могут варьировать для различных АГ.
30
Глава 1
значительно расширить число тестируемых молекул. Наиболее ¦существенный
Предыдущая << 1 .. 4 5 6 7 8 9 < 10 > 11 12 13 14 15 16 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed