Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 11

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 5 6 7 8 9 10 < 11 > 12 13 14 15 16 17 .. 122 >> Следующая

недостаток МКА заключается в том, что они в силу своей моноспецифичности
обладают лишь слабыми анти-тен-преципитирующими свойствами либо не
обладают ими совсем. По этой причине тесты с растворимыми антигенами,
основанные на использовании моноклональных реагентов, ограничиваются теми
модификациями, которые предусматривают непрямую регистрацию реакции
антиген - антитело, т. е. наиболее чувствительными.
Потребность в полиспецифичных преципитирующих антисыворотках (и контроль
их качества), равно как и значение самих преципитирующих методов, в связи
с разработкой технологии получения МКА не снижается.
7. Выбор методов с участием антител
Целесообразно обобщить (табл. 1.1) методы, основанные на использовании
антител, начиная с получения и оценки их свойств и кончая заключительным
этапом исследования антигена.
Работа с антителами зачастую требует от исследователя самостоятельного
получения реагентов, в связи с чем в первую очередь возникает задача
получения иммуногена. В случае растворимых простых иммуногенов для
достижения хороших результатов молекулы должны быть как можно лучше
¦очищены. Поэтому первый рассматриваемый метод - это оценка чистоты
антигенного препарата. После сбора антисыворотки необходимо оценить ее
качество. В зависимости от характера тест-системы, используемой на
заключительном этапе, сыворотку необходимо проверить на специфичность,
титр и параметры связывания. Это требует знания процедур контроля
качества, в некоторых случаях включающих в себя определение
изотопического спектра антител. На заключительном этапе важен правильный
выбор теста (табл. 1.2) -например, выбор между иммунофлуоресцентным и
иммунопероксидазным методами в случае тканевых и клеточных антигенов либо
между агглютинацией, ELISA, РИА и реакциями преципитации в случае
растворимых антигенов. При использовании некоторых тест-систем может
потребоваться очистка антител для последующего мечения либо получение и
мечение антиглобулинового реагента. К оценке преимуществ и недостатков
тест-систем следует подходить осторожно.
Литература
1. Kohler G., Milstein С. Nature, 256, 495 (1975).
Таблица 1.2. Выбор метода, основанного на использовании антител
Цель метода
Рекомендуемые методы
Оценка чистоты иммуногена
Контроль качества антител
(а) Специфичность
(б) Титрование
(1) Растворимые антигены
(2) Клетки и тканевые антигены
(в) Чистота Ig-фракции АТ
(г) Чистота/титр антиглобулинового реагента
(д) Определение изотипа антител
Методы исследования антигена
(а) Исследование антигенного родства между молекулами (в растворе)
(б) Анализ компонентов антигенных смесей в растворе
(в) Количественное определение компонентов антигенных смесей в
растворе
(г) Идентификация и оценка чистоты препаратов с низкой концентрацией
антигенов
(д) Количественное определение антигена в растворе
Двойная диффузия в геле (ДДГ) Иммуноэлектрофорез (ИЭФ) Двумерный ЙЭФ
Электрофорез в полиакриламидном геле
ДДГ, ИЭФ, двумерный ИЭФ Иммунофлуоресцентный анализ
(ИФЛА)
Иммунопе-роксидазный тест (ИПТ)
1) на стандартных клетках/тканях
2) как конкурентный тест с известным АТ
Комплемент-зависимая клеточная цитотоксичность
Пассивная гемагглютинацня (ПГА) ELISA
Иммунорадиометрический анализ (ИРМА)
Вестерн-блоттинг
Обратная радиальная иммунодиффузия
ПГА (включая антиглобулиновый тест)
ИРМА
ИФЛА
ИПТ
ИЭФ
ELISA, ИРМА, ПГА ДДГ
ELISA \ меченые анти-изотипиче-
ИРМА / ские антитела
ИФГТД 1 окрашивание с помощью
> анти-изотипических анти-
ИПТ J тел
ДДГ, ИЭФ, двумерный ИЭФ ИРМА и РИА
Иммуноферментный анализ (ИФА) РТГА
ДДГ, ИЭФ, двумерный ИЭФ Вестерн-блоттинг Двумерный ИЭФ
Вестерн-блоттинг после разделения сложной смеси белков в полиакриламидном
геле РИД
Ракетный ИЭФ РТГА
32
Глава 1
Продолжение табл. 1.2
Цель метода Рекомендуемые методы
(е) Определение клеточных и тканевых антигенов (1) Популяционный анализ
клеточной суспензии (2) Типирование тканей: эритроциты лимфоциты
Обратная пассивная гемагглютина-ция ИФА и ELISA РИА и ИРМА ИФЛА,
ИПТ ИФА, ИПТ FACS Обратное пассивное розетирование с нагруженными
антителами эритроцитами Прямая гемагглютинация (см. кн. 2) Комплемент-(-
опосредованная антителами цитотоксичность (см. кн. 2) ИФЛА Другие новые
методы (см. кн. 2)
ГЛАВА 2
ПОЛУЧЕНИЕ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ И КОНТРОЛЬ ИХ КАЧЕСТВА
Д. Кэтти и Ч. Райкундалия
1. Введение
Для разных целей требуются сыворотки с различными свойствами, поэтому
нельзя разработать единый способ иммунизации животных, который бы
гарантировал получение продукта, идеально удовлетворяющего всем
требованиям. Тем не менее существуют определенные принципы получения
антител, которые могут быть приняты за "основные правила". Идеальные
антисыворотки получают в определенной степени методом проб и ошибок,
поскольку каждый иммуноген отличается от других и процесс образования
антител у каждого животного имеет свои особенности. Необходимые свойства
антисыворотки ¦- это высокий титр в сочетании с высокой средней авид-
Предыдущая << 1 .. 5 6 7 8 9 10 < 11 > 12 13 14 15 16 17 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed