Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 14

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 122 >> Следующая

млекопитающих. Овца и кролик хорошо отвечают на белки, гликопротеины и
липопротеины других животных и человека, а также на антигены патогенных
микроорганизмов. Важно помнить, что иммунизация микроорганизмами или их
антигенными экстрактами может активировать естественный гуморальный ответ
на антигены собственной микрофлоры реципиента за счет общих (перекрестно
реагирующих) эпитопов.
2.2. Применение адъювантов
Адъюванты (лат. adjuvare •- помогать) состоят из различных веществ,
физические и (или) биологические свойства которых позволяют в различной
степени изменять степень гуморального ответа на иммуноген (см. табл.
2.2). Свойства адъювантов хорошо изучены 0-3]. Адъюванты применяют в
основном для получения антисывороток к тимус-вависимым иммуногенам в тех
случаях, когда их использование позволяет снизить оптимальные дозы
антигена до микрограммовых. Известно правило, согласно которому
наименьшие дозы иммуно-
58
Глава 2
гена пр,и длительном применении позволяют получить сыворотку наилучшего
качества с точки зрения титра и аффинности. Ниже мы приводим примеры
адъювантов, наиболее широко применяемых для иммунизации животных.
2.2.1. Полный адъювант Фрейнда (ПАФ)
ПАФ состоит из смеси минерального масла (Байол F), взвеси
инактивированных нагреванием Mycobacterium butyricum или Mycobacterium
tuberculosis и эмульгатора Арлацела А. Водный раствор иммуногена
смешивают с адъювантом, и образуется эмульсия водной фазы в масле. ПАФ
значительно усиливает и продлевает гуморальный ответ, что впервые описано
Фрейндом [4]. Эмульсия стабильна и после внутримышечного введения (в/м)
формирует депо иммуногена с медленным поступлением его в циркуляцию.
Другие основные свойства данного адъюванта обусловлены микобактериями,
некоторые продукты которых выступают как мощный стимулятор клеток
регионарных лимфоузлов и грануломы, возникающей вокруг депо. В этом
отношении наиболее выраженными свойствами обладают М. tuberculosis.
Большое количество антител образуется гранулемой, и эта активность
сохраняется до тех пор, пока персистирует иммуноген, иногда - в течение
многих лет. В результате введения ПАФ образуются грануломы, и собственные
ткани организма приобретают свойства аутоиммуногена, поэтому данный
адъювант не может .применяться для иммунизации людей. Однако это едва ли
не наиболее эффективный широко применяемый адъювант, используемый в
повседневных методах получения антисывороток к растворимым антигенам
животных и антигенам эмульгированных клеток. ПАФ в подавляющем
большинстве случаев вызывает образование IgG у кролика (у овцы
преобладает IgGi и у морской свинки - IgG2). ПАФ и неполный адъювант
Фрейнда (НАФ), не содержащий микобактерий, поставляет фирма Difco Ltd.
(см. приложение). Приготовление этих адъювантов из отдельных компонентов,
эмульгирование и методы введения описаны в разд. 4.1.
2.2.2. Неполный адъювант Фрейнда (НАФ)
Для депонирования иммуногена его можно эмульгировать с минеральным маслом
и без микобактерий. Это тоже приводит к длительной и интенсивной
выработке антител, поскольку резорбция иммуногена из места инъекции
происходит постепенно. Однако при использовании НАФ образование антител
обычно слабее и менее продолжительно, возможно, из-за
Получение поликлональных антител и контроль их качества
39
того, что при этом не происходит активное образование грануломы в области
депо. Кроме того, у морских свинок изменяется изотип антител - например,
в ответ на введение растворимых белков совместно с НАФ вырабатывается
IgG|. Более слабые патологические эффекты позволяют использовать НАФ
подкожно для бустерной иммунизации.
2.2.3. Иммуноген, адсорбированный на квасцах
Использование алюминиевых квасцов для адсорбции белков при щелочном pH
[5] расширяет возможности получения новых иммуногенов и позволяет
продлить гуморальный ответ. При в/м введении такие иммуногены
способствуют накоплению плазматических клеток в области депо. При этом
побочные эффекты оказываются минимальными, и данный метод используют для
вакцинации человека дифтерийным и столбнячным анатоксинами.
Адсорбированный иммуноген может быть введен подкожно, внутрибрюшинно или
внутримышечно. Наиболее предпочтительно использовать адсорбированный на
квасцах иммуноген для иммунизации мышей, часто в смеси с убитыми клетками
Bordetella pertussis (см. разд. 2.2.4), и одно из его главных преимуществ
заключается в том, что при этом происходит быстрая диссеминация
иммуногена, исключающая связанную с введением антигена
сенсибилизированным животным возможность развития острой летальной
анафилактической реакции. Обычно используют методику иммунизации малыми
дозами (м'икрограммы) через несколько дней в течение нескольких недель.
Анатоксины и другие иммуногены, адсорбированные на квасцах, у ряда видов
вызывают выработку IgE. Приготовление адсорбированных на квасцах белков
для иммунизации описано в разд. 4.2.
2.2.4. Bordetella pertussis
Для усиления гуморального ответа, особенно у мышей, антиген вводят вместе
Предыдущая << 1 .. 8 9 10 11 12 13 < 14 > 15 16 17 18 19 20 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed