Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 9

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 122 >> Следующая

специфичность антител. Прост и требует минимального оборудования. Низкая
чувствительность, большая продолжительность
То же, что и для ДДГ; кроме того, необходимо оборудование для
электрофореза
Разносторонняя характеристика АГ; оценка степени родства между АГ.
Применение ограничено АГ, мигрирующими К аноду. Полуколичествен-ный
метод. Необходима охлаждаемая пластина для геля
Возможность быстрой оценки А Г в области средней чувствительности.
Применение ограничено АГ, мигрирующими к аноду, требует моноепе-
цифических АТ. Необходимы антигенные стандарты
Радиальная им-мунодиффузия в геле (РИД)
Обратная РИД
Агглютинационные
тесты
Пассивная гемаг-глютииация (ПГА)
Реакция торможения гем агглютинации (РТГА)
Обратная ПГА и реакция ]розетиро-вания
Диффузия АГ в содержащем АТ геле с образованием колец преципитации
Диффузия АТ в содержащем АГ геле с образованием колец преципитации
АТ реагируют с растворимым антигеном, который "нагрузили" иа поверхность
эритроцитов; реакцию проводят в планшетах для микротитро-ваиия
Пассивная гемагглю-тииация тормозится в присутствии специфического
антигена
Опосредованная антигеном агглютинация нагруженных АТ эритроцитов Может
быть использована для определения поверхностных клеточных антигенов
Поликлональные, моио-специфические, преципи тирующие
Поликлональные, моио-специфические, преципи тирующие
Поликлональные н иеко-торые моноклональные
Поликлональные и иеко торые моноклональные
Моноклональные или аф-фииио очищенные моио-специфические, поликлональные
1-20 мкг/мл А Г
1-20 мкг/мл АТ
1-10 нг/мл АТ
1-10 иг/мл АГ
1-10 нг/мл АГ
Очень простой метод, требующий минимального оборудования, но больших
временных затрат, особенно для АГ с высокой мол. массой. Необходимы
антигенные стандарты То же, что для РИД. Тест продолжительный, особенно
для IgM. Необходима стандартная сыворотка сравнения (контрольная)
Необходимы фиксация АГ на эритроцитах и тщательная стандартизация.
Конечную точку титрования (титр) определяют визуально. Чувствительный и
разиостороииий метод определения специфичности и титра АТ. Применим для
тестирования аи-тиглобулинов при использовании нагруженных АТ клеток
Как тест на определение АГ в области средней чувствительности соперничает
с ELISA и ИРМА. Результаты менее точны в связи с субъективной оценкой
конечной точки титрования. Может использоваться для определения
перекрестной реактивности АГ
То же, что для РТГА. Возможны осложнения в связи с эффектом прозоны. В
качестве АГ могут быть использованы целые клетки (для теста иа
определение поверхностных маркеров), если розетки образуются с АГ-
положительными клетками
Продолжение табл. 1.1
Принцип
Требования, предъявляе-
мые к антителам
Чувствительность1)
теста
Преимущества и недостатки метода
Методы с использованием меченных ферментами реагентов Иммуноферментный
анализ
(ИФА)
Субстраты с хромогенными, флуо-рогенными или люминесцентными свойствами.
Конкурентный метод анализа АГ Иммунологический тест с модулированным
ферментом
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA, от англ. enzyme-linked
immunosorbent assay) Использование ме-
Связанный с ферментом АГ конкурирует со свободным А Г за АТ,
фиксированные на пластике или дру гих поверхностях, на пример микросферах
и т. д.
Меченный ферментом АГ, на котором реакция "фермент - суб страт"
стерически блокируется при связывании с АТ. Этот процесс ингибируется в
присутствии свободного АГ. Гомогенный тест в жидкой фазе
Используют меченные ферментом АТ: связывание АТ с фиксированным на
твердой фазе АГ ингибируется в присутствии свободного А Г
Поликлональные, моно специфические (Ig-фрак ция или аффинно очи щенные
АТ) нли моно клональные АТ для фик сации на твердой фазе
Поликлональные или мо ноклональные
< 10 нг/мл АГ
Мкмоль - пкмоль/л для карственных ществ
Поликлональные нли моноклональные, очищенные и меченые
ле-
ве
< 10 нг/мл АГ
Простой принцип конкурентного анализа; можно использовать различные типы
твердой фазы. Необходим стандартный конъюгированный АГ. Результат может
оцениваться визуально или по оптической плотности (необходим
спектрофотометр)
Обычно применяется для количественного определения небольших молекул,
например молекул лекарственных веществ, где антигенные детерминанты
расположены в непосредственной близости от структур, отвечающих за
связывание фермента. Чувствительный н быстрый метод определения, не
требующий процедур отмывания илн разделения
Простой принцип ингибирования с использованием стандартных
конъюгированных АТ. Чувствительный метод количественного определения АГ-
Возможны модификации
ченых АТ для количественного определения АГ нли АТ. Типы твердой фазы и
субстраты как для ИФА
Иммунологические тесты, основанные на использовании радиоактивной метки
Р адиоиммунологи-ческий анализ (РИА)
Конкурентный ме-
Метод сандвича: фик сированные на твер дой фазе АТ связы вают АГ, а тот в
свою очередь - вторые АТ, конъюгированные с ферментом Таким образом
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed