Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
соединения обладают антиканцерогенными свойствами. В этой связи авторы
работы [45] предложили метод разделения и количественного определения
лигнанов в сырых растительных экстрактах при помощи обращенно-фазовой
жидкостной хроматографии. Этот метод, как показали эксперименты,
позволяет осуществлять скрининг экстрактов с целью определения содержания
в них антиканцерогенных агентов. Из числа изученных систем неподвижная
фаза - элюент наиболее простой оказалась следующая: лихросорб RP-8 -
ацетонитрил/вода (50:50 или 40:60), обеспечивающая удовлетворительное
разделение. Для разделения стандартной смеси из восьми лигнанов требуется
в этом случае менее 20 мин. Альтернативный метод предусматривает
применение силикагеля в качестве неподвижной фазы и смеси
хлороформ/гексан (1:1) в качестве элюента. Оба метода были использованы
для разделения лигнанов, содержащихся в экстрактах Austrocedrus
chilensis.
В работе [46] описан простой ВЭЖХ-метод, позволяющий проводить
скрининг и точное количественное определение фе-
Вторичные растительные метаби. пиы 653
гнольных вторичных лихеновых соединений. Их разделение осуществлялось на
колонке с обращенной фазой лихросорб RP-8 при градиентном элюировании:
линейный градиент от элюен-та А (вода/уксусная кислота, 98: 2) до элюента
Б (метанол) в течение 70 мин. Таким образом была разделена стандартная
смесь, состоявшая из тринадцати веществ. Для рутинного анализа сырых
экстрактов лихенов рекомендуется использовать хроматографическую систему
с предколонкой, что позволяет увеличить время жизни основной колонки.
Повышенный интерес, проявляемый в последнее время кгос-сиполу, связан
с опубликованием статьи, в которой сообщается, что это соединение
обладает контрацептическими свойствами-[47]. При проведении работ с
госсиполом большое значение имеет степень чистоты используемого
соединения. Авторами работы [47] разработан чувствительный, селективный и
быстрый метод качественного и количественного анализа гидрофобного и
ионизуемого полифенолами госсипола. Разделение было осуществлено на
обращенной фазе CiS. Чтобы получаемый пик был достаточно острым, в
подвижную фазу метанол/вода (80:20) добавляли 0,1% фосфорной кислоты.
Этот метод пригоден для разделения сырых экстрактов семян хлопчатника.
Обращенная фаза С18 была использована также для количественного
определения куркумина в ризомерах из Curcuma longa\ элюентом служила
смесь ацетонитрил/вода/уксусная кислота (51 : 49: 5) [48].
Ротенон и его производные получили широкую известность как
потенциальные инсектициды. Они высокотоксичны для насекомых и низших
живых организмов и относительно мало токсичны для растений и
млекопитающих. В работе [49] опубликован один из ВЭЖХ-методов выделения,
идентификации и количественного определения ротеноидов в растительных
экстрактах. Разделение было проведено на обращенной фазе Qe при
экспоненциальном градиентном элюировании; стартовый элю-ент-
ацетонитрил/вода (35:65), конечный элюент-100%-ный ацетонитрил (25 мин).
14.3. Терпеноидные агликоны
Разделение терпеноидных агликонов в зависимости от их полярности можно
проводить на силикагеле или на обращенной фазе. В данном разделе мы
рассмотрим некоторые типичные примеры их разделения.
Адсорбционная хроматография используется для определения
спиростаноловых сапогенинов в растениях. Разделение ди-осгенина,
играющего важную роль в производстве стероидов, было осуществлено на
колонке с силикагелевой неподвижной фазой (|я-порасил) при элюировании
смесью легкий петролей-
654 Глава 14
ный эфир (т. кип. 60-80 °С)/изопропанол (12:1); детектором служил
дифференциальный рефрактометр [50]. Интересный метод изучения
тритерпеноидов при помощи ВЭЖХ без их модифицирования предложен авторами
работы [51]. Метод основан на сочетании адсорбционной и обращенно-фазовой
хроматографии. Шесть аналогов [J-амарина можно разделить на си-
ликагелевой фазе зорбакс BP-SIL при элюировании смесью гек-сан/этанол
(96:4), тогда как дигидрокси-, моногидрокси- и мо-нокарбокситритерпеноиды
элюируются этой же смесью состава (99:1). Удовлетворительное разделение
монокетон- и моногид-рокситритерпеноидов достигается при использовании
менее полярной подвижной фазы гексан/этанол (99,85:0.15). Более полярные
тритерпеноиды, например соясапогенол А и его производные, были разделены
на колонке с обращенной фазой зорбакс BP-ODS при элюировании смесью
метанол/вода (80:20), содержащей 0,05% муравьиной кислоты концентрацией
88%. Хроматографию на обращенной фазе можно использовать и для разделения
менее полярных тритерпеноидов (лупе-ол, ланостерин, фриделин, эупол и
др.), применяя в качестве элюента смеси метанол/вода (96:4). Поскольку
максимум поглощения тритерпеноидов, имеющих двойную углеродную связь,
соответствует 202 нм, эта длина волны была выбрана для обнаружения
ненасыщенных соединений данной группы. Она также пригодна для обнаружения
и терпеноидов с сопряженными двойными связями.
