Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
сенецифиллин и сенеционин из Senecio vulgaris были разделены на С^-фазе
при элюировании в изократическом режиме смесью метанол/0,01 М калий-
фосфатный буфер (pH 6,3) (1:1) [103]. Этот элюент,
по-видимому, наиболее пригоден для разделения пирролизидиновых алкалоидов
со сходными свойствами. Авторы работы [89] использовали обращенно-фазовую
хроматографию с неподвижной фазой на основе стиролдивинилбензола для
разделения алкалоидов из Senecio jacobaea и Senecio vulgaris. В последнем
случае основные компоненты разделялись в течение 18 мин, элюентом служила
смесь ацетонитрил/0,1 М водный раствор аммиака (25:75) (рис. 14.4).
Вторичные растительные метаболиты 663
В сочетании со стирол-дивинилбензольными неподвижными фазами
допускается использование подвижных фаз с более высоким pH, разрушающих
силикагелевые неподвижные фазы. Соединения основного характера дают при
разделении в таких условиях вполне симметричные пики в отсутствие ион-
парных реагентов. Для препаративных работ рекомендуются элюенты на основе
ацетонитрила и водных растворов аммиака, поскольку они допускают
упаривание в вакууме, тогда как если элюен-тами служат фосфатные буферные
растворы, необходимо прибегать к экстракции. Ацетонитрил, предназначенный
для ВЭЖХ, слабо поглощает при 220 нм, поэтому разделение пирро-
лизидиновых алкалоидов градиентным элюированием не сопровождается
снижением чувствительности и дрейфом нулевой линии. И наконец, снимаются
проблемы, связанные с необходимостью использования твердых буферных
солей, тогда как при разделении алкалоидов других классов такие проблемы
приходится решать.
Для анализа пирролизидин-]М-оксидных алкалоидов, содержащихся в
растениях рода Symphytum, авторы работы [104] применили колонку,
заполненную ц-бондапаком NH2, элюентом служила смесь ацетонитрил/вода
(92:8).
14.5.4. Индольные алкалоиды
Методы выделения и разделения индольных алкалоидов рассмотрены в работе
[86], автор которой изучил влияние основного модификатора на разделение
стрихнина и бруцина. Очень быстрое разделение с хорошим разрешением этих
алкалоидов было осуществлено на колонке с силикагелем при элюировании
смесью эфир/метанол (9: 1), содержащей 1% диэтиламина. Образования
хвостов при этом не происходило. Алкалоиды, продуцируемые культурой
клеток Catharanthus roseus, были разделены методом обращенно-фазовой
хроматографии, элюентом служила смесь ацетонитрил/вода (62:38),
содержащая 0,1% триэтиламина [105]. Для количественного определения
винка-мина, аповинкамина и 14-эпивинкамина предложена [106] следующая
хроматографическая система: неподвижная фаза на основе привитого
октадецилсилана, а в качестве элюента - смесь метанол/0,01 М карбонат
аммония (75:25), pH 7,8. Роль внутреннего стандарта выполнял папаверин.
Обнаружение осуществлялось при 254 нм. Чувствительность и точность
данного метода достаточно высоки, и он пригоден для рутинного определения
винкамина в лекарственных препаратах, разбавленной моче и плазме крови.
Винкамин и близкие ему по структуре алкалоиды можно также разделить на
лихросорбе RP-8 или ц-бондапаке Cts при элюировании смесью
ацетонитрил/0,01 М карбонат аммония (6:4 или 7:3) [107]. Данный метод
приго-
664 Глава 14
деи для разделения стереоизомеров, сложных эфиров-гомологов и для
группового разделения. Однако оптические или структурные изомеры в этом
случае не разделяются. Их хроматографирование рекомендуется проводить на
колонке с силикагелем при элюировании смесями хлороформ/метанол (95:5),
"-гек-сан/хлороформ/метанол (60:30: 10 или 80: 10: 10) [108]. Элюирование
четырехкомпонентной смесью "-гексан/хлороформ/аце-тонитрил/метанол
(55:25:20:3) еще больше повышает селективность разделения и позволяет
разделять цис- и транс-изомеры, например граяс-изомеры этиловых эфиров
аповинкамовой, эгшвинкамовой и винкамовой кислот элюируются перед
соответствующими цыс-изомерами.
14.5.5. Другие алкалоиды
Разделение основных представителей группы хинных алкалоидов осуществлено
на химически привитой фазе С18 путем элюирования смесью метанол/уксусная
кислота/вода (25:1:75)
[109], однако для разделения цинхонина и цинхонидипа необходимо
несколько другое соотношение компонентов (20: 1:80). Данный метод
селективен, достаточно достоверен и пригоден для анализа лекарственных
препаратов или препаратов, содержащих соли хинина.
Различные аконитиновые алкалоиды можно разделить на неподвижной фазе С
j 8 при элюировании смесью ТГФ/фосфатный буфер (pH 2,7) (89:11) [87].
Альтернативный метод - ион-парная хроматография (элюент - ТГФ/фосфатный
буфер, pH 2,7, 85: 15, в присутствии 0,01 М гексансульфоната натрия в
качестве противоиона). Предел обнаружения мезаконитина составляет 12 нг,
бензоилмезаконитина 15 нг. Чувствительность обнаружения при 235 нм в пять
раз выше, чем при 254 нм.
Для анализа алкалоидов спорыньи обычно используют фазу С[8 и смесь
ацетонитрил/0,01 М карбонат аммония (1:2 или
2 : 3) в качестве элюента [1]. Однако разделение новых природных
