Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
[69]. Однако препаративное вы-
деление методом ВЭЖХ сверозида и гентиопикрозида удалось осуществить на
силикагеле, элюентом служила смесь этилаце-тат/метанол (95:5).
14.4.2. Сапонины
В литературе описано всего лишь несколько примеров разделения сапонинов
при помощи ВЭЖХ, что отчасти обусловлено проблемами, возникающими при УФ-
обнаружении сапонинов, а также сложностью их структуры. Получившие
широкую известность выпускаемые в Китае женьшеневые препараты долголетия
(корни Рапах ginseng) изучались в очень многих лабораториях. Один из
методов количественного анализа биологически активных даммарановых
сапонинов (гинзенозидов) описан в работе [70]. Перед разделением
гинзенозиды обрабатывают бензоилхлоридом в пиридине (реакция должна
пройти количественно), поскольку получаемые при этом производные
гинзенозидов отличаются интенсивным поглощением в УФ-обла-сти.
Бензсшлированные гинзенгиновые сапонины разделяют на колонке с
силикагелем при элюировании смесью м-гексан/ди-хлорметан/ацетонитрил
(15:3:2) и обнаруживают при 240 нм. Авторами работы [71] предложен один
из методов количественного определения гинзенозидов, исключающий стадию
получения УФ-активных производных. В данном случае колонка заполняется
силикагелем, элюентом служит смесь н-гептан/м-бу-танол/ацетонитрил/вода
(1000:446:132:36). Обнаружение проводится при 207 нм. Разделение
заканчивается через 40 мин. Для определения гинзенозида Rgi пригодна
обращенно-фазовая система: Cis-фаза и смесь метанол/вода (44:56). ВЭЖХ
была также применена для выделения гинзенозидов Rf, Rg2 и Rhi из смеси
сапонинов [72]. Описанная в этой работе методика вклю-
Вторичные растительные метаболиты 657
Rha
Сайкосапонин с R:p_OH сайкосапонин а
R:ot-OH сайкосапонин а
Рис. 14.3. Структура сайкосапонинов.
чает препаративное разделение методом ВЭЖХ на силикагеле путем
элюирования верхним слоем смеси м-бутанол/этилаце-тат/вода (4:1:2) и
последующее препаративное разделение методом ВЭЖХ на колонке с углеводной
неподвижной фазой при элюировании смесью ацеюнитрил/вода (86:14).
Обнаружение каждого из соединений проводится рефрактометрически. В статье
[73] описан еще один пример крупномасштабного выделения гинзенозидов из
листьев и стеблей американского женьшеня Ра-пах quinquefolium методом,
объединяющим колоночную хроматографию на силикагеле и полупрепаративную
ВЭЖХ. Разделение методом ВЭЖХ проводится на двух соединенных друг с
другом силикагелевых колонках элюированием нижним слоем смеси
хлороформ/метанол/этилацетат/вода (2:2:4: 1).
Корни Bypleurum falcatum (Bupleuri radix) служат сырьем для
лекарственных средств, играющих очень важную роль в традиционной
восточной медицине. В них содержатся три основных сапонина олеанового
типа - так называемые сайкосапо-нины а, с и d (рис. 14.3). Авторы работы
[74] провели изучение Bupleuri radix методом ВЭЖХ. Истинные
сайкосапонины, содержащие лабильные аллилоксидные связи, были превращены
в УФ-активные диеновые сапонины мягкой кислотной обработкой и далее
разделены при помощи обращенно-фазовой хроматографии на колонке с
октадецилсилилированным силикагелем при элюировании смесью
метанол/вода/уксусная кислота/три-этиламин (75 : 25 : 0,2 : 0,2).
Первым в этих условиях элюировался диеновый сапонин, полученный из
сайкосапонина с, далее следовали менее полярные диеновые производные -
сайкосапонины d и а. Разделение с хорошим разрешением (пики достигали
нулевой линии) длилось всего 20 мин, хотя производные последних двух
сапонинов различались лишь конфигурацией при С-16-ОН. Обнаружение про-
42-1489
658 Глава 14
водилось при 254 нм, в качестве внутреннего стандарта для количественного
анализа можно использовать антрацен.
Авторами работы [75] предложена методика количественного определения
глициризиновой кислоты из Radix Iiquiritiae (Glycyrrhiza glabra),
предусматривающая разделение на обращенной фазе ц-бондапак С i g
элюированием смесью метанол/вода/уксусная кислота (60 : 34 : 6). В этих
же целях можно использовать также ИОХ [76].
14.4.3. Сердечные гликозиды
Эти гликозиды найдены в нескольких семействах растений. Они используются
для лечения болезней, вызванных ослаблением сердечной деятельности.
Некоторыми из этих соединений когда-то отравляли стрелы. Сердечные
гликозиды содержат два типа агликонов - с пятью- или шестичленным
лактоновым циклом. Гликозиды с агликонами первого типа называют
карденолида-ми (например, дигитоксигенин), а гликозиды с агликонами
второго типа получили название буфанолиды или буфадиенолиды
(сцилларенин). Ввиду важности лекарственных препаратов на основе
сердечных гликозидов и их фармацевтических рецептур проблеме разделения
этих гликозидов при помощи ВЭЖХ посвящено очень большое число работ,
особенно если учесть, что первая публикация на эту тему появилась в 1974
г. [1]. Предложенные методики разделения предусматривают использование
