Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
лактамовых производных алкалоидов группы эрготоксина осуществлено на
лихросорбе ЫНг при элюировании смесью эфир/этанол (96:4). Смесь пар
диастериомеров эргокристина и эргокристама разделялась в этих условиях в
течение 12 мин
[110].
Колхицин, основной алкалоид растений рода Colchicum, обладает
интересными фармакологическими свойствами; он был исследован несколькими
группами ученых. Разделение этих алкалоидов при помощи ВЭЖХ было впервые
осуществлено на колонке с силанизированным силикагелем элюированием
смесью ацетонитрила с водой [111]. Позднее было проведено успешное
разделение смеси из шести производных колхицина на фазеС^ при элюировании
смесью ацетонитрил/метанол/фосфатный бу-
Вторичные растительные метаболиты
66Г
фер (pH 6,0) (16:7:79) [112]. Эти же условия были использованы для
одновременного определения колхицина и колхицеина в культуре микробов, а
также для определения содержания кол-хицеинамида в процессе трансформации
микроорганизмов N-ме-тилколхицеинамидом [114].
14.6. Неалкалоидные азотсодержащие вещества
Беталаины ¦-это растительные пигменты, возрастающий интерес к которым
обусловлен их хемотаксономической ролью, а также использованием в
качестве пищевых красителей. ВЭЖХ-метод быстрого анализа бетаксантинов
предусматривает применение лихросорба RP-8 в качестве неподвижной фазы и
градиентное элюирование смесью метанол/уксусная кислота/вода [115]. В
работе [116] описан усовершенствованный вариант методики разделения
методом обращенно-фазовой хроматографии. Смесь семи бетаксантинов и семи
бетацианинов была разделена на колонке с лихросорбом RP-18 в следующих
условиях: линейный градиент (60 мин) от растворителя А (1,5%-ный раствор
фосфорной кислоты в воде) до смеси А + 40% Б (фосфорная кислота/уксусная
кислота/ацетонитрил/вода, 1,5: 20 : 25 : : 53,5). Этим методом
осуществлен качественный анализ пигментов в неочищенных растительных
экстрактах. Хорошее разделение бетанина и его изомера изобетанипа
получено на ц-бонда-паке С18 при элюировании смесью метанол/0,05 М
К.Н2РО4 (18:82) плюс фосфорная кислота до pH 2,75 или при градиентном
элюировании, предусматривающем увеличение содержания метанола в элюенте.
Для определения капсаицина, придающего остроту стручковому красному
перцу, в экстрактах Fructus capsici авторы работ [118-120] применили
обращенно-фазовую ВЭЖХ (элюентом в этом случае служила смесь
метанол/вода). Предел обнаружения капсаицина составил около 100 нг. Более
чувствительный метод предложен авторами работы [121]. Разделение смеси
капсаицина и шести его аналогов проводят на фазе С]8, элюентом служит
смесь ацетонитрил/вода (40:60). Обнаружение осуществляется по
флуоресценции (длина волны возбуждения 270 нм, испускання 330 нм), в
результате чего предел обнаружения капсаицина снижается до 3 нг.
14.7. Выводы и перспективы
Анализ опубликованных данных позволяет заключить, что для разделения
природных продуктов наиболее широко используется обращенно-фазовая
хроматография. Введение ион-парных ре-
666 Глава 14
агентов делает метод пригодным для анализа содержащихся в растениях
соединений самой различной полярности. Весьма перспективными
представляются неподвижные фазы на основе полистирол-дивинилбензольных
смол, на которых уже было успешно проведено разделение пирролизидиновых
алкалоидов [89].
Как важный этап дальнейшего развития ВЭЖХ следует рассматривать
объединение ВЭЖХ с масс-спектрометрией. В работе [122] опубликованы очень
интересные результаты, полученные при использовании хромато-масс-
спектрометрии в потоке. Часть поступающего из колонки элюата при помощи
соот-ветствущего делителя потока направляется в хемоионизацион-ную камеру
квадруполыюго спектрометра, где фракции элюата подвергаются ионизации,
причем подвижная фаза способствует мягкой ионизации анализируемых
компонентов. Этот метод применен для изучения гликозидов Digitalis. В
данном случае ди-гитоксин можно обнаруживать в виде его молекулярного
иона.
Масс-спектрометрия как метод обнаружения в ВЭЖХ удобна при
исследовании полярных или термически нестойких компонентов растений.
Хромато-масс-спектрометрия дает важную информацию о структуре разделяемых
соединений непосредственно в ходе анализа, поэтому этот метод найдет
широкое применение в исследованиях природных продуктов.
Литература
1. Kingston D. G. 1. J. Nat. Prod, 42, 237 (1979).
2. Adams M. A" Nakanishi К. J. Liqud Chromatogr, 2, 1097 (1979).
3 Wehrli A., Hidenbrand J. C" Keller H. P., Slampfil R., Frei R. W., J.
Chromatogr., 149, 199 (1978).
4. Van Sumere C. F., van Brussel ft7., van de Casteele K., van Rompaey
L" in: Swain Т., Harbone J. B" van Sumere C. F. (Eds.): Biochemistry of
Plant Phenolics, Recent Advances in Phytochemistry, v. 12, p. 1-28,
Plenum Press, New York, 1979.
5. Hostettmann K., Hostelimann М., in: Harborne J. B, Marby T. J.
(Eds.): Advances in Flavonoid Research, 1975-1981, pp. 1-18, Chapman and
Hall, London.' 1982.
