Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 272

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 266 267 268 269 270 271 < 272 > 273 274 275 276 277 278 .. 296 >> Следующая

препаративного метода выделения фенолов применяются не в полной мере. В
обзорах [4, 5] рассматривается в основном разделение фла-воноидов.
Полярные агликоны и гликозиды во многих случаях удается успешно разделить
методом обращенно-фазовой хроматографии на ODS-фазах при элюировании
смесью метанол/уксусная кислота/вода или метанол/фосфорная кислота/вода.
Сложные смеси высокополярных фенолов были разделены также при помощи ион-
парной хроматографии [6, 7]. Альтернативный метод разделения полярных
соединений, предложенный автором работы [8], основан на применении
забуференного силикагеля. Этим методом были разделены кислоты, входящие в
состав пива и придающие ему горьковатый привкус [7, 8].
14.2.1. Флавоноидные агликоны
Разделение на силикагелевых неподвижных фазах проводится, как правило,
нечасто, однако эти неподвижные фазы хорошо подходят для разделения
неполярных или слабополярных фла-воноидных агликонов. Эффективное
разделение наиболее важных цитрусовых полиметоксилированных флавонов было
осуществлено на лихосорбе Si 60 при элюировании смесью "-
гептан/изопропанол (60:40) [9]. Тангеретин, тетра-О-метилскутел-лареин,
гептаметоксифлавон, нобилетин и синенсетин были идентифицированы в
неочищенном экстракте мандариновых и апельсиновых корок в течение 25 мин.
Как показали результаты определения коэффициентов емкости 17
полиметоксилированных флавонов, проведенные при помощи метода нормально-
фазовой ВЭЖХ с использованием четырех систем растворителей с различным
содержанием воды, целесообразнее всего осуществлять элюирование смесями
н-гептан/этанол (75:25) и н-геп-тан/изопропанол (60:40) при содержании
воды от 0,05 до
0,02% [10]. Сложные смеси изофлавоновых агликонов были разделены на ц-
порасиле при элюировании различными градиентными системами [11]. Однако
быстрое разделение дайдзеи-на и генистеина, содержащихся в гидролизате
Glycine max, достигнуто при изократическом элюировании смесью дихлор-
Вторичные растительные метаболиты 647
г"
111
Номер Соединение R1 R2 R3 tR, мин
пика
1 Дельфинидик ОН он он 5,7 '
2 Цианидин ОН он н 8,7
3 Петунидин оси. он он 11,1
4 Пеларгонидин н он н 13,6
5 Пеонидин осн3 он н 17,0
6 Мальвидин осн3 он осн3 20,3
О 10 20 30 t.MHH
Рис. 14.1. Разделение антоцианидинов методом обращенно-фазовой ВЭЖХ [15].
метан/этанол/уксусная кислота (97 : 3 :0,2)/гексан (8:2). Разделение в
изократическом режиме сокращает длительность анализа, так как не требует
переуравновешивания колонки перед каждым анализом. Для разделения
ацетатов флавоноидов также можно использовать силикагель и смеси
бензол/ацетонитрил (85:20), бензол/ацетон (90:15) или
изооктан/этанол/ацетонитрил (70 : 16 : 5,5) [12].
Разделение агликонов с тремя и более свободными гидроксильными
группами легко проходит на обращенных фазах с привитыми
октадецилсилильными или октилсилильными группами. Практическое применение
техники обращенно-фазовой хроматографии описано в работах [13, 14] на
примере разделения изофлавоновых агликонов соевых бобов. В работе [15]
описано успешное разделение шести наиболее распространенных
антоцианидинов на колонке с ц,-бондапаком при элюировании смесью
вода/уксусная кислота/метанол (71:10:19); в течение 25 мин были получены
полностью разрешенные пики шести стандартных антоцианидинов (рис. 14.1).
648 Глава 14.
Приведенные выше условия были использованы для разделения
антоцианидинов Vitis rotundifolia [15], Hibiscus sabdarif-fa [15J,
Vaccinium myrtillus [16], а также для разделения пигментов цветов при
изучении генетических аспектов наследования признаков, связанных с
окраской цветов [17].
Разделение а- и (S-эпимеров флаван-4-олов - важных промежуточных
соединений биосинтеза флавоноидов можно осуществить на колонке с |я-
бондапаком Cis при элюировании смесью метанол/вода (1:1) или
метанол/вода/уксусная кислота (33: :65:2) [18]. Условия разделения
некоторых типичных флаво-ноидных агликонов приведены в табл. 14.1.
14.2.2. Флавоноидные гликозиды
Разделение гликозидов проводится, как правило, на обращенных фазах Cis
при элюировании смесями ацетонитрил/вода или метанол/вода с небольшим
содержанием уксусной кислоты. Эти подвижные фазы удобны для разделения
сложных смесей глико-зндов в условиях градиентного элюирования и
допускают использование УФ-детекторов [20-22]. В ряде случаев уксусная
кислота заменялась очень небольшим количеством фосфорной кислоты [23-26].
В зависимости от задачи разделения в ряде случаев может оказаться
целесообразной замена химически привитой фазы Cis на фазу Cs. Например,
флавон-С-гликозиды изовитексинарабинозид и витексинрамнозид очень плохо
разделяются на лихросорбе RP-18, тогда как на фазе RP-8 разделение
проходит удовлетворительно (элюент - вода/уксусная кислота/метанол) [27].
Авторы работы [28] выбрали для разделения изомеров О-гликозидов
Предыдущая << 1 .. 266 267 268 269 270 271 < 272 > 273 274 275 276 277 278 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed