Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
ИОХ, адсорбционной и обращенно-фазовой хроматографии.
В некоторых случаях перед разделением исходные гликозиды , переводят в их
производные [77, 78]. Сердечные гликозиды, со- ' держащиеся в растениях
рода Digitalis, можно разделить на силикагеле или на обращенной фазе.
Прекрасное сравнительное изучение этих двух подходов, проведенное
авторами работы [79], показало, что адсорбционная и обращенно-фазовая
хроматография дополняют друг друга. Поскольку элюирование в этих двух
системах действительно происходит в обратном порядке, каждый может, как
правило, выбрать такую систему, которая больше отвечает требованиям
(например, по времени разделения или разрешению). Если разделение ведется
на силикагеле, в качестве элюента рекомендуется пользоваться смесью
дихлорметан/метанол/вода (920:80:12), тогда как идеальными элюентами для
разделения на колонках с химически привитой обращенной фазой Ct8 являются
смеси ацетонитрил/вода (37:63) и диоксан/вода (45:55). Обнаружение
осуществляется УФ-детектором (230 нм). Обращенно-фазовые системы
несколько более предпочтительны с точки зрения подготовки для анализа
проб готовых форм.
Буфадиенолидные гликозиды, содержащиеся в растениях рода Urginea
maritima, различных родов Scilla и в препаратах
Вторичные растительные метаболиты 659
Таблица 14.3. Разделение сердечных гликозидов
Разделяемые глико Неподвижная фаза Элюеит j Обна
Лите
зиды руже
ратура
ние, им
Гликозиды дигитали Лихросорб Si-60 н-Пентанол/ацето- 220 82
са (низкой поляр нитрил/изооктан/
ности) Н20 (175:60:620:
Гликозиды дигитали Лихросорб Si-60 220 82
са (средней и вы
сокой полярности)
Ланатозид С и со Лихросорб Si-100 Дихлорметан/мета- 230 79
путствующие веще нол/Н20 (320 : 80 :
ства : 12)
Гликозиды дигитали Нуклеосил Си Ацетонитрил/Н20 230
са (37:63), диоксаи/
Н20 (45:55),
ТГФ/диоксан
(2: 1)/Н20 (67:33)
Буфадиенолидные Нуклеосил С]8 или Ацет01штрнл/Н2О 280 81
гликозиды (глико (д.-бондапак Cig (1:3)
зиды Scilla) Лихросорб RP-8 Ацетонитрил/Н20 80
(18 : 28)
Scilla, были проанализированы качественно и количественно методом
обращенно-фазовой ВЭЖХ при элюировании смесями ацетонитрил/вода [80, 81].
Наличие системы сопряженных двойных связей в этих гликозидах облегчает их
обнаружение по поглощению в УФ-области при 280 или 300 нм.
Некоторые типичные примеры разделения при помощи ВЭЖХ сердечных
гликозидов приведены в табл. 14.3.
Для анализа бутадиенолидов и карденолидов особенно эффективна
обращенно-фазовая хроматография на ц-бондапаке при элюировании смесями
метанол/вода (2:1), ацетонитрил/вода (1:1) или ТГФ/вода (2:3) [83].
14.4.4. Различные гликозиды
Посредством полупрепаративной ВЭЖХ был выделен новый вид монотерпеновых
глюкозидов из выпускаемого в Китае лечебного препарата, изготовляемого из
Schizonepeta tenuifoliа [84]. Неподвижной фазой служил ц-бондапак С]8,
элюентом - смесь ацетонитрил/метанол/вода (1:1:4), обнаружение
осуществлялось автоматически. Эти глюкозиды, по-видимому, имеют следующее
строение:
(15,4К,8Е)-9-0-р-0-глюкопиранозил-п-мент-8(9)-ен-3-он. К ним относится
также глюкозид (1S,4R,8R)-8,9-дигидрокси-я-мент-З-он, последний глюкозид
имеет диоксановое кольцо, образованное двойными связями между глюкозой и
агликоном.
42*
660 Глава 14
14.5. Алкалоиды
Обсуждению методов разделения алкалоидов при помощи ВЭЖХ посвящен ряд
обзоров [1, 3, 85, 86], а число соответствующих статей постоянно растет.
Алкалоиды входят в состав многих семейств растений и относятся к числу
важных природных продуктов в связи с их биологической и фармакологической
активностью.
В настоящее время ВЭЖХ широко используется для определения алкалоидов,
например в токсикологических и фотохимических исследованиях, анализе
метаболитов [86].
Алкалоиды - это соединения с основными свойствами, поэтому при их
разделении pH элюента должен быть выше 7, так как при этом подавляется
ионизация и пики сужаются. Вместе с тем при высоких значениях pH
наблюдается растворение силикагеля. В большинстве случаев предпочтительно
