Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
102
рых составляла 100 кД, определяли площадь пика, полученного при микроденситометрическом сканировании ауторадиографов геля, и ее выражали в процентах общего связывания лектина с гелем. Представленное в работе Bramwell, Harris (1978), рис. 4 и 5, разрешение пиков недостаточно, чтобы принять результаты этих измерений без сомнений. Более того, существенные различия значений вычисленного отношения Кон A/WGA в нормальных и малигнизированных клетках тоже должны быть поставлены под сомнение, так как общее связывание лектина, надо полагать, включает как специфическое, так и неспецифическое связывание, а в некоторых случаях и связывание с гликопротеидами, не относящимися к поверхности.
Если не учитывать это при оценке полученных данных, выявляются трех- и пятикратные различия (в процентах) значений Кон A/WGA по связыванию их с белком (молекулярная масса которого 100 кД), выделенным из немалигнизированных исходных клеток или гибридов с супрессией малигнизации по сравнению с таковым, полученным из исходных или гибридов опухолевых клеток. К сожалению, не показано, как скоро после гибридизации были сделаны эти измерения или является ли экспрессия нормальных белков с молекулярной массой 100 кД также нестабильной в гибридных клонах в состоянии супрессии малигнизации при культивировании их in vitro в течение короткого времени (Jonasson et а]., 1977).
Резюмируя изложенное, нужно отметить, что результаты, полученные Bramwell и Harris, хотя и вызывают интерес новизной, однако должны быть подтверждены с помощью более точных методов анализа.
8.2.5. Мембранные белки, индуцированные SV40
В противоположность ранеэ обсуждаемым исследованиям, в которых делались попытки связать общие изменения гликозилирования мембран опухолевых клеток с ростом опухолей и метастазированием, исследования Wallach и соавт. (Schmidt — Ullrich et al., 1975, 1977, 1978; Linetal., 1977; Verma et al., 1977) направлены на решение вопроса, как изменения белков в плазматических мембранах опухолевых клеток модифицируют физические свойства мембран. В качестве модельных систем использовались нормальные лимфоциты хомяка и клетки лимфоидных опухолей, индуцированные SV40 (GD248).
Эти исследования заслуживают внимания не только тем, что авторы старались получить высокоочищенные, с хорошими характеристиками плазматические мембраны из нормальных и опухолевых клеток, но также разнообразием используемых методических приемов.
Некоторые изменения в мембранах опухолевых клеток определялись с помощью изоэлектрического фокусирования тритоновых экстрактов мембран GD248 и нормальных лимфоцитов (Schmidt — Ullrich et al., 1975, 1978). Во-первых, обнаружено, что белки мембран опухолевых клеток фокусируются в более широкой области значений pH, чем белки нормальных мембран, РAS-окрашенные глико-зилированные белки фокусируются при более кислых значениях pH,
103
тогда как негликолизированные белки перемещаются в область более щелочных значений pH (7,5—8). Во-вторых, установлено, что в мембранах опухолевых клеток появлялась новая группа гликопротеидов, значение pi которых составляло 4,5. Увеличение кислотности гликопротеидов было отнесено за счет повышенного содержания сиаловых кислот, хотя доказательств в пользу этого в работе не представлено.
Щелочное смещение было исследовано с помощью метода лазерной раман-спектроскопии, который регистрирует изменения молекулярного движения липидов и белков мембран, их межмолекулярные взаимодействия с гидрофобной сердцевиной мембран и особенности структурных конформационных изменений полипептидов в мембранах. При сравнении спектров мембран нормальных и опухолевых клеток в областях Амид 1 и Амид 2 с такими стандартами амидов, как аспарагин, глютамин и поли-Ь-аспарагин, щелочной сдвиг был связан с увеличением амидных остатков боковых цепей аспарагиновой и глютаминовой кислот, что является характерной чертой стимулированных Кон А, а не покоящихся лимфоцитов (Wallach et al.,
1979). Аспарагиназа — фермент, который используется в клинике при лечении аспарагинсинтетаздефицитиых лимфоидных новообразований, предотвращает стимуляцию митогенеза в покоящихся лимфоцитах конканавалином А с помощью неизвестного механизма, приводящего к модификациям плазматической мембраны. Wallach и сотрудники предположили, что недостаточное посттрансляционпое деамидирование мембранных белков может быть необходимым для пролиферации лимфоцитов.
Двухмерное изоэлектрическое фокусирование в комбинации с иммуноэлектрофорезом позволило обнаружить два новых глико-протеидных антигена с pi 4,5 и 4,7 в мембранах опухолевых клеток (Schmidt-Ullrich et al., 1977), 8У40-специфические белки имели предполагаемую молекулярную массу 50—60 кД и 90—100 кД соответственно и, по мнению авторов, представляли TSTA- и U-антигены (Schmidt-Ullrich et al., 1978). Гликопротеид, имеющий pi 4,5, обнаружен только в трансформированных SV40 клетках, где его содержание превышало 10 % всех окрашиваемых куммасси голубым белков. Наличие большого количества необычных гликопротеидов в плазматических мембранах опухолевых клеток подтвердило предположение, что физические свойства их мембран могут быть изменены. Это было впоследствии подтверждено результатами исследования мембран нормальных лимфоцитов и клеток GD248 с помощью лазерной раман-спектроскопии (Schmidt-Ullrich et al., 1975, 1978; Verma et al., 1977; Wallach et al., 1979). Были обнаружены значительные различия температуры индуцирования фазовых переходов липидов и белков мембран. При анализировании СН-растянутой и акустической областей спектра установлено, что в мембранах GD248 Тх появился при температуре на 12 °С ниже, чем в мембранах нормальных клеток. Липидный фазовый переход происходил в более широком интервале температур, свидетельствуя об уменьшении кооперативности.
