Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Три из четырех линий клеток мышей СЗН/10Т-^ /CL8, трансформированных химическими канцерогенами, имели уровень фибронектина выше, чем в нормальных (Jones et al., 1976). Полное отсутствие корреляции между уровнем фибронектина и образованием опухолей также продемонстрировано на 12 линиях клеток человека (Der, Stanbridge, 1978) и на более чем 40 линиях клеток разных видов животных, трансформированных различными агентами (Kahn, Shin,
7 В—1329
97
1979). Несмотря на то что нормальные фибробласты имеют тенденцию накапливать высокий уровень фибронектина, нормальные эпителиальные клетки либо имеют тенденцию к полной утрате фибронектина, либо содержат только небольшое количество этого белка (Chen et alM 1977; Asch, 1979; Kahn, Shin, 1979). Это позволяет предположить, что изменения содержания клеточного фибронектина, возможно, скорее отражают процессы дифференцировки, чем трансформации. При исследовании около 20 линий клеток мышей, крыс, хомяков и человека, полученных непосредственно из злокачественных опухолей, Pearlstein и сотрудники обнаружили, что все исследованные карциномы были полностью лишены фибронектина, в то время как в саркомах уровень фибронектина существенно варьировал от 0 до очень высоких значений. Многие саркомы имели больше фибронектина, чем некоторые первичные культуры, приготовленные из нормальных тканей (Pearlstein, 1976). Подобным образом не найдена взаимосвязь фибронектина и тканевого происхождения серий первичных культур, приготовленных из аденокарциномы молочной железы мышей и эпителиальных клеток нормальной молочной железы (Asch, 1979). Значительное увеличение в процентном отношении содержащих фибронектин клеток обнаружено после гибридизации родительских линий, которые были уже опухолевыми, что еще раз указывает на утрату взаимосвязи способности к образованию опухолей и наличия фибронектина (Marciani et al., 1976).
Главным источником артефактов в исследованиях фибронектина явилось открытие зависимости его содержания от плотности клеток. Как количество, так и локализация клеточного фибронектина обычно изменяются по мере увеличения популяционной плотности в культуре. Почти во всех линиях клеток, синтезирующих CFN, его количество прогрессивно увеличивается по мере увеличения плотности клеток и длительности их культивирования (Gahmberg et al., 1974; Pearlstein, Waterfield, 1974; Mautner, Hynes, 1977; Der, Stanbridge, 1978; Furcht, 1978; Kahn, Shin, 1979). Эта зависимость содержания CFN от плотности культуры может несколькими путями приводить к артефактам. Незначительные различия скорости роста в двух культурах могут привести в течение 10 ч культивирования к значительным различиям популяционной плотности и, следовательно, содержания фибронектина в культуре. Аналогично этому незначительные различия эффективности разделения клеток в процессе субкультивирования двух разных клеточных линий могут приводить к возникновению многоклеточных агрегатов (пересаживаемых в качестве дочерних культур), отличающихся числом клеток. Клетки этих агрегатов в экспериментах будут иметь ненормально высокую плотность популяции, которая может натолкнуть на ложное представление о различии продукции фибронектина этих двух клеточных линий. Наконец, клеточные линии значительно различаются способностью образовывать стабильные клеточные контакты в субконфлюентных плотностях (Skehan, Friedman, 1979). В линиях, которые имеют тенденцию к образованию кластеров, становится невозможным разделение клеток по местам их контактов. В этих линиях образуются сравнительно
98
большие многоклеточные группировки с большим количеством клеточных контактов. Они имеют высокую локальную плотность популяции. Клетки с такой же самой плотностью популяции, но не образующие кластеров в субконфлюентной фазе, будут иметь меньше контактов и обладать меньшей локальной плотностью популяции. Так, при однаковой общей плотности двух линий клеток количество фибронектина, которое они продуцируют, может существенно отличаться, потому что отличается их локальная плотность популяций. Эти артефакты не учитывались экспериментаторами при анализе результатов сравнительных исследований продукции фибронектина.
Резюмируя изложенное, можно заключить, что инфицирование культур клеток потенциально онкогенными вирусами обычно, хотя не обязательно, сопровождается потерей или снижением содержания фибронектина. Уменьшение наступает независимо от того, становятся ли инфицированные клетки опухолевыми. Так, уменьшение CFN, которое сопровождает инфицирование клеток потенциально онкогенными вирусами, возможно, отражает скорее влияние вируса, чем эффект онкогенной трансформации. В спонтанно трансформирующихся и трансформированных химическими веществами линиях клеток не обнаружена корреляция способности их к образованию опухолей и количества клеточного фибронектина. Аналогичные результаты получены на первичных культурах, приготовленных из тканей in vivo, уровень фибронектина был независим от нормальной или малигни-зированной ткани и ее происхождения. Проанализировав опубликованные данные, можно прийти к выводу, что совсем не существует корреляции содержания фибронектина и способности клеток к образованию опухолей.
