Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
3.2.4, Гликопротенд Бромвелл—Гаррисса
Развитие методов исследования гликопротеидов, основанных на их сродстве к лектинам (см. обзор Juliano, 1978), значительно облегчило изучение роли изменений гликолизирования белков в онкогенной трансформации клеток. Один такой метод использует меченные радиоактивным йодом лектины для обнаружения гликопротеидов после разделения ДСН—ПААГ-электрофорезом (Robinson et al., 1975; Tanner Anstee, 1975; Burridge, 1976; Gurd Evans, 1976; Gurd,
1977). Bramwell и Harris использовали этот метод в сочетании с соматической гибридизацией клеток для выявления в составе мембран гликопротеидов, которые могут быть связаны с процессом превращения нормальных клеток в опухолевые (Bramwell, Harris, 1978, 1978а).
В предыдущих исследованиях, выполненных Harris и сотрудниками, было обнаружено, что слияние клеток, имеющих высокую способность к образованию опухолей, с клетками, которые имели низкую опухолегенность или вообще не имели ее, приводило к образованию гибридов, проявляющих существенно сниженную способность к образованию опухолей после перевивки их генетически совместимым сублетально облученным новорожденным мышам или бестимусным безволосым мышам (Harris, 1971). Этот феномен был назван «супрес-
7*
99
сея малигнизации». После разных периодов культивирования гибридов снова проверялась их способность к прогрессивному росту in vivoj которая могла быть детерминирована наличием общих рецессивных дефектов.
Нормальные клетки или клетки со значительно сниженным потенциалом к опухолеобразованиго должны устранить эти дефекты при гибридизации с опухолевыми клетками и посредством этого подавить малигнизацию. Повторное появление признаков опухолевых клеток в популяциях гибридных клеток может возникнуть в результате продолжительного отбора генетических вариантов в связи с потерей или перестановкой родительских хромосом или экстрахромосом-ных генов (Harris, 1971; Jonasson, Harris, 1977). Клетки, обладающие высокой способностью к опухолеобразованию, должны избирательно подавить рост родительской популяции, чтобы вырасти в пальпируемые опухоли (Harris, 1971).
По мпению Bramwell и Harris, фенотипическими признаками, близко связанным с экспрессией злокачественного поведения кле* ток in vivo, являются (1) признаки, которые экспрессируются в родительских популяциях опухолевых клеток, (2) признаки, которые исчезли в гибридах, сопутствующие супрессии малигнизации, и (3) признаки, появляющиеся снова в опухолях, которые независимо росли из полученных популяций гибридов (Bramwell, Harris, 1978).
Различия связывания 12Б1 конканавалина А (Кон А) и агглютинина проростков семян пшеницы (WGA) с разделенными в электрофорезе гликопротеидами мембран нормальных, малигпизированных и клеток, у которых имеется супрессия малигнизации, были использованы Bramwell и Harris как тест для определения изменений состава гликопротеидов мембран, связанных с малигнизацией (Bramwell, Harris, 1978; 1978а). Были выявлены кислые гликопротеиды с pi приблизительно около 4, которые изменяли свою способность связываться с Кон А и WGA параллельно с изменением способностей этих клеток к опухолеобразованию. В злокачественных клетках белок связывался с Кон А в большей степени, чем с VVGA, тогда как в немалигнизированных клетках и гибридах, характеризующихся супрессией малигнизации, наблюдалась обратная картина. Нет данных, позволяющих предполагать, что экспрессия гликопротеидов, изменяющихся при малигнизации, зависит от роста ткани. Различия лек-тиносвязывающих свойств более выражены в опухолях, растущих in vivo, чем в культивируемых in vitro опухолевых клетках. В своей нативной форме гликопротеид в плазматической мембране находится в виде димеров (молекулярная масса приблизительно 200 кД), которые после обработки восстанавливающими дисульфидные связи агентами превращались в мономеры с молекулярной массой 100 кД. Поведение белка с молекулярной массой 200 кД в некотором отношении подобно рецептору глюкозы эритроцитарных мембран (Krupka, 1971; Jung, 1974). Например, его можно пометить, ковалентно связавс динитрофлюоробензолом в реакции, которая стимулируется глюкозой и ингибируется цитохалазином В. В настоящее время не известно, относится ли этот белок к другим Кон А-связывающим глюкозорегу-
100
лирующим белкам, описанным для многих нормальных и трансформированных тинов клеток (Shiu et al., 1977; Poussegur, Yamada, 1978; McCormick et al., 1979).
Оценивая эти эксперименты, важно определить допущения, которые лежат в основе теста генетической сегрегации и способа связывания лектинов, с помощью которого осуществлялись исследования* Генетический сегрегационный тест, используемый авторами для определения, является ли данная характеристика непосредственно связанной с малигнизацией, основан на следующих предпосылках:
(1) супрессия малигнизации осуществляется на генетическом уровне*
(2) она появляется во всех клетках первичной популяции гибридов и (3) она влияет на такие свойства опухолевых клеток, которые определяют их способность к прогрессивному росту in vivo и которые на этапе слияния клеток пе меняют иммуногенности, жизнеспособности или перевиваемости полученных популяций гибридов.
