Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Так как в ранних исследованиях было обнаружено, что гибриды при супрессии малигнизации содержат почти полный набор хромосом обеих родительских клеток и повторная экспрессия опухолегеннос-ти связана с селективной потерей гибридами хромосом (Harris* 1971), то полагали, что при супрессии малигнизации набор хромосом должен обязательно изменяться. Последующие исследования опровергли эти данные. Супрессия малигнизации не была связана с появлением каких-либо заметных компонентов хромосом из иемалигни-зированных клеток (Jonasson, Harris, 1977) и повторная экспрессия признаков малигнизированных клеток не коррелировала с потерей каких-либо нормальных родительских хромосом. Таким образом, в настоящее время механизм супрессии малигнизации не ясен.
В связи с относительно большим размером инокулума клеток (104 и выше), который обычно используется в тестах, определяющих способность к опухолеобразованию гибридов при супрессии малигнизации, нельзя исключить наличия в инокулуме очень малого количества клеток, сохранивших свою способность к опухолеобразованию. Действительно, в ранних исследованиях показано, что частота образования опухолей клонами гибридов значительно варьировала (Wiener et al., 1971; Klein et al., 1973) и это приписывалось нестабильности кариотипа популяций гибридов (Wiener et al., 1974). Однако другие эксперименты свидетельствуют о том, что в популяциях, имеющих супрессию малигнизации и стабильный кариотип, могут присутствовать гибриды, обладающие опухолегенностыо (Jonasson et al., 1977; Sager, Kovac, 1978). Sager и Kovac проверили на опухолеобразование гибриды эмбриональных фибробластов китайского хомяка, используя введение очень малого количества клеток. Они вводили в инокулум облученных клеток, не образующих опухолей, до 10 гибридов на инъекцию и доказали возможность наличия опухолегенных клеток в популяциях гибридов с супрессией малигнизации. Эти эксперименты не позволяют утверждать, что изменение гликозилирования белков коррелирует с экспрессией признаков злокачественности in vivo, как это сделали Bramwell и Harris Если после слияния клеток небольшой процент гибридных клеток останется
101
способным к опухолеобразованию или приобретет эту способность в результате генетической сегрегации in vitro, корреляция малигни-зации и изменения экспрессии гликопротеидов должна обнаруживаться на клеточном уровне. Однако такого рода исследований проведено не было.
Причины феномена неспособности гибридов к образованию опухолей от начала до конца не исследованы. Изучалась лишь возможность участия в этом феномене изменений антигенности гибридов, тогда как другие вероятные объяснения его не рассматривались. Например, слияние клеток само по себе может изменить межклеточные взаимодействия или места прикрепления, необходимые малигнизированным клеткам для поддержания жизнеспособности в течение ранних стадий трансплантации животным-хозяевам (гл. 2). Если это может происходить, то способность к прогрессивному росту in vivo отражает не супрессию малигнизации, а скорее снижение жизнеспособности клеток в период трансплантации.
Биохимические методы также заслуживают тщательного критического анализа. В экспериментах Bramwel] Harris (1978) проведено сравнение связывания лектина с гликопротеидами мембран исходных клеточных линий, гибридов и полученных при перевивке гибридов опухолей. Гликопротеиды экстрагировались из теней мембран (Atkinson, 1973), стабилизированных ZnCl2, или из суспензий нормальных и опухолевых тканей 0,5 %-ным тритоном Х-100 в трис-буфере. Маловероятно, что препараты плазматических мембран пемалигнизированных и малигиизированных тканей или сходных родительских и гибридных клеточных линий сравнивали в чистой виде или что экстрагированные гликопротеиды извлечены исключительно из поверхности мембран. Тритоновые экстракты тканей были явно загрязнены цитоплазматическими белками, а тот, якобы установленный факт, что эти загрязнения не мешают последующему анализированию гликопротеидов поверхности, не подтвержден соответствующими исследованиями. Растворенные в трипсине белки разделялись с помощью электрофореза в системе ДСН — градиентный ПААГ (7,5—20 %) с буферной системой Laemmli (1970) ил к с помощью двухмерного изоэлектрического фокусирования ДСН — ПААГ-электрофореза по O'Farrell (1975). Обработанные гели лекти-нами содержали гликопротеиды (молекулярная масса приблизительно 100 кД), которые в препаратах опухолевых клеток связывали незначительное количество меченых WGA и большое количество Кои А по сравнению с нормальными клетками или клетками с супрессией малигнизации.
В этих исследованиях не были изучены возможности того, что специфическое связывание лектина может быть измерено с помощью конкурентного ингибирования связывания гаптеновым сахаром, что лектины могут быть использованы в концентрации, достаточной для насыщения сайтов, обладающих как высоким, так и низким сродством, или что WGA и Кон А могут быть связаны молекулами одного вида во всех клеточных препаратах, которые анализировались. Для сравнения связывания Кон А и WGA с белками, молекулярная масса кото-
