Генная инженерия растений. Лабораторное руководство - Дрейпер Дж.
ISBN 5-03-001854-9
Скачать (прямая ссылка):
отбеливателя).
- Стерильная водопроводная вода (350 мл во флаконе на 500 мл).
Приложение 2 [И]
Среда для культуры растительных клеток и тканей
А. Среды на основе солей MS [53]
(Получение проростков, укоренение побегов, культивирование опухолей и
соматический эмбриогенез моркови.)
MS О
Компоненты
Концентрация (мг/л)
СаС12-2Н20
NH4NO3
KN03
KI
440.000
1650.000
1900.000
Н3ВО3
Na2Mo04-2H20
СоС12-6Н20
КН2Р04
0,830
0,025
170,000
6,200
0,250
MgS04-7H20
MnS04-4H2Q
CuS04-5H20
ZnS04-4H20
370,000
22,300
0,025
8,600
172
Глава 2
Продолжение таблицы
Компоненты
Концентрация (мг/л)
FeS04
№2ЭДТА
Глицин
Инозитол
Никотиновая кислота Пиридоксии-НС1 Тиамин-НС1 Сахароза
27,850
37,250
2,000
100,000
0,500
0,500
0,100
30С00,00Э
Доводят pH до 5,8 0,1 М раствором НС1. Все компоненты, за исключением
сахарозы, поставляются в расфасованном виде фирмой Flow Laboratories Ltd.
RD (от англ. root disk medium)
(Поддержание срезов запасающих органов.)
Состав аналогичен MSO, только концентрация солей в два раза ниже;
среда не содержит сахарозы и содержит антибиотики: рифампицин (20
мкг/мл), карбенициллин (250 мкг/мл) н фунгицид нистатин (6 мкг/мл).
MSO 1C
(Культивирование опухолей, индуцированных штаммами A. tumefaciens дикого
типа.)
Добавляют карбенициллин (1 мг/мл) к расплавленной MSO при 45°С.
MSP1
(Культивирование недифференцированного каллуса N. taba-cum.)
Эта среда идентична MSO, но содержит следующие добавки: НУК
(нафтилуксусная кислота) 2,0 мг/л 6-БАП (6-бензиламинопурин) 0,5 мг/л
Приготовление исходных растворов:
НУК: Растворяют 500 мг НУК в 20 мл 50%-ного этанола. Добавляют 80 мкл
к 1 л MSO.
6-БАП: Растворяют 126 мг 6-БАП в 1,0 мл 1М НС1, добавляют
99 мл дистиллированной воды и стерилизуют фильтрованием.
Добавляют 400 мкл к 1 л MSO.
MSP1 9М, 7М, ЗМ
(Культивирование протопластов N. tabacum.)
Добавляют маннитол в требуемом количестве - 9%, 7% или
Трансформация клеток двудольных растений
173
3% (вес на объем) -к MSP1 перед доведением ее до конечного объема:
MSP1 9М -90 г/л; MSP1 7М - 70 г/л; MSP1 ЗМ - 30 г/л. MSK
(Размножение пазушных почек N. tabacum.)
Состав аналогичен MSO, но дополнительно среда содержит кинетин (0,2
мг/л).
UM (от англ. Uchimiya и Murashige)
(Культивирование клеток моркови и Petunia сорта Blue Lace в
суспензионной культуре.)
Соли MSO со следующими добавками:
Пиридоксин 9,50 мг/л
Тиамин 9,90 мг/л
Никотиновая кислота 4,50 мг/л Кинетин 0,25 мг/л
2,4-Д 2,00 мг/л
Гидролизат казеина 2000,00 мг/л Сахароза 30 000,00
мг/л, pH 5,8
MSD4X2
(Регенерация побегов у Petunia, табака и льна.)
Соли MSO со следующими добавками:
НУК 0,1 мг/л
6-БАП 1,0 мг/л
Сахароза 30 000,0 мг/л, pH 5,8
MS1K
(Общая регенерация побегов.)
Соли MSO со следующими добавками:
ИУК 8,00 мг/л
Кинетин (Sigma) 2,56 мг/л
MS FLAX
(Размножение пазушных почек льна.) Солевой раствор MSO с добавлением
кинетина (Sigma) -0,05 мг/л.
Все приведенные выше среды на основе MSO могут быть агаризованы путем
добавления 0,8% агара (8 г/л). Агар, как правило, растворяют, обрабатывая
среду перед автоклавнрова-нием текучим паром.
Б. Среда Кабоше [16]
(Рост клеток при низких плотностях.)
В эту среду перед использованием необходимо добавить глутамин в
концентрации 2 мМ. Глутамин можно растворить в
174
Глава 2
дистиллированной воде (23,36 мг/мл), стерилизовать фильтрованием и
хранить при 20°С до использования. Добавляют 1,2 мл к 99,8 мл жидкой или
расплавленной агаризованной среды, охлажденной до 45 °С. Для
приготовления исходного раствора пиридоксина его растворяют в
