Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
334
Fe2O3 + 6H +2e-->2Fe2 + 3 H2O Кислород окиси железа - конечный акцептор электронов в цепи окислительно-восстановительных процессов, ведущих к восстановлению соединений железа - обладает высокой ферриредуктазной активностью.
Метод основан на учете количества образующегося двухвалентного железа при взаимодействии окиси железа с почвой. Ход анализа
На технических весах берут 1 г почвы в пробирку на 25 - 50 см3, прибавляют 10 мгоокиси железа в виде тонко измельченного порошка, перемешивают. Прибавляют пипеткой 1 см3 дистиллированной воды, 1 см" 1%-го раствора глюкозы.
Пробирки ставят в анаэростат, закрывают его крышкой, подсоединяют к вакуумному насосу и медленно в течение 3-5 минут удаляют воздух до разрежения 0,9-1,0 атм (10-12 мм рт.ст.).
Анаэростат помещают в термостат при 370C на 48 ч. После окончания инкубации медленно открывают анаэростат, впуская атмосферный воздух.
В пробирки (опытные и контрольные) прибавляют по 18'см3 0,5 M серной кислоты для экстрагирования восстановленного железа. Встряхивают 5 мин на ротаторе, фильтруют через беззольный фильтр, 10 CMJ фильтрата пипеткой переносят в мерные колбы на 25 см". Прибавляют цилиндром 12 см3 ацетатного буфера, 1 см" 0,5%-го раствора 2,2'-дипиридила, доливают дистиллированной водой до метки, перемешивают и оставляют на 30 мин.
Колориметрируют на фотоколориметре с зеленым светофильтром в кюветах шириной 10 мм. Расчет производится по калибровочной кривой, составленной для стандартных растворов соли Мора. Коэффициент пересчета 200.
Активность ферриредуктазы выражают в миллиграммах восстановленного Fe 203 на 100 г почвы за 48 ч.
Реактивы
1. Ацетатный буфер: 100 г CH3COONa растворяют в 500 см" воды, добавляют 300 см" ледяной уксусной кислоты и доводят объем до 1 дм".
2. Стандартный раствор соли Мора (содержит 0,1 мг Fe в 1 см3): 0,7022 г FeSO4 (NH4)2S04 6 H2O растворяют в холодной прокипяченной дистиллированной воде, подкисленной 2 см" концентрированной H2SO4, и разбавляют водой до 1 дм". Рабочие растворы железа готовят разведением стандартного раствора.
3. 0.5%-й раствор 2,2'-дипиридила.
Сульфатредуктаза (НАД ? H2: сульфат-оксидоредуктаза. КФ. 1.8.3)
Сулъфатредуктаза катализирует восстановление сульфатов до сульфитов: Na2SO4 + НАД ? H2 -> Na2SO3 + H2O + НАД Na2SO3 + НАД ? H2 -> Na2S + 3 H2O + 3 НАД.
335
Метод основан на учете уменьшения количества сульфатов в почве после анаэробной инкубации ее с субстратом (сернокислым натрием).
Ход анализа
На технических весах берут навеску почвы 1 г, помещают ее в пробирку. Прибавляют 20 мг CaCO3, перемешивают. Приливают пипеткой 1 см3 0,25 M раствора Na2SO4 и 1 см3 5%-го раствора глюкозы в качестве донора водорода. Пробирки встряхивают и помещают в анаэростат, закрывают его крышкой, подсоединяют к вакуумному насосу и медленно удаляют воздух в течение 3-5 мин до разрежения 0,9-1,0 атм. и помещают в термостат при 37°С на 7 дней.
После инкубации анаэростат медленно открывают. Содержимое пробирок переносят дистиллированной водой в мерные колбы на 100 CMJ, перемешивают и фильтруют через беззольный фильтр.
Берут пипеткой 25 см3 фильтрата в коническую колбу на 200 см3. Доливают цилиндром 100 см3 дистиллированной воды, опускают кусочек индикаторной бумаги конго красного, подкисляют разбавленной HCl (1:1) до сине-фиолетовой окраски индикаторной бумаги (pH 3,0).
Колбу нагревают до кипения, из бюретки приливают в горячий раствор 10 см3 осадительной смеси BaCl2 + MgCl2, хорошо перемешивают и оставляют на 2-3 часа или на сутки.
В раствор пипеткой вносят 2-3 капли 1%-го раствора Na2S. Приливают пипеткой 2 см3 5%-го раствора гидроксиламина и нейтрализуют по каплям 10%-м раствором аммиака до изменения цвета индикаторной бумаги конго в красный (pH 5,2). Приливают цилиндром смесь NH4Cl + NH4OH (pH 10), добавляют индикатор хромоген черный или хром темно-синий. Титруют из бюретки 0,01 M раствором комплексона III до изменения окраски индикатора. Примечание
1. Предварительно следует оттитровать осадительную смесь BaCl2 + MgCl2. Для этого берут пипеткой 25 см" осадительной смеси, разбавляют дистиллированной водой до 100 см", вносят 10 CMj аммиачного буфера (pH 10), в присутствии индикатора хромогена черного титруют комплексоном III до исчезновения окраски в точке эквивалентности. Учитывается расход комплексона III на связывание присутствующих в анализируемом фильтрате ионов кальция и магния.
2. Отбирают 25 см3 фильтрата, разбавляют дистиллированной водой до 100 см3, прибавляют 3 капли 1% раствора Na2S, добавляют 2 CMj 5% раствора солянокислого гидроксиламина и 10 см3 буферной смеси NH4Cl + NH4OH, 20 мг индикатора хромогена черного или хрома темно-синего, перемешивают и титруют трилоном Б (комплексен III) до изменения окраски в точке эквивалентности в голубой цвет.
336
Активность сульфатредуктазы (X) выражают в миллиграммах SO3 2
in V- а-(б-в) ?p-Tso3 ' № на 10 г почвы: X - -?--—- ,
где а - количество см3 трилона Б (комплексона III), затраченное на титрование пробы осадительной смеси BaCl2 +MgCl2; б - количество CMJ трилона Б, израсходованное на титрование анализируемого раствора после осаждения BaSO4; в - количество см3 трилона Б, затраченное на титрование суммы ионов Ca2* + Mg2", в аликвоте раствора; TSo3~ - титр молярного раствора трилона Б по SO3"; н — навеска воздушно-сухой почвы, г;р -разведение.
