Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
При необходимости из ткани можно извлечь аминокислоты и количественно определить каждую из них.
Определения суммарной токсичности почвы, растительной продукции биотестированием
Предлагаемый метод модифицирован и апробирован на кафедре агрохимии МГУ Е.Х. Ремпе и Л.П. Ворониной.
Метод основан на высокой отзывчивости семян редиса на токсические вещества. Расчет ведется путем учета снижения длины корней проростков семян в растворах препаратов вытяжек из анализируемых образцов почвы, сока корневой системы и конечной продукции по сравнению с контролем, выраженное в процентах. В полевых условиях при определении суммарной токсичности контролем должен служить образец, отобранный с варианта опыта без применения химических средств защиты растений.
320
Отбор пробы для анализа
Образцы почвы должны отбираться не менее чем из 15 мест опытного участка. Весь почвенный образец должен быть тщательно перемешан. Средний образец для анализа (не менее 100 г с каждого опытного участка) должен храниться и транспортироваться до эксперимента в целлофановом мешочке. Анализируется свежий сырой материал.
Растительные образцы отбираются не менее тщательным образом. Средняя проба растительного материала должна быть представительна (не менее 10 корнеплодов или растений) и тщательно усреднена. Анализы необходимо выполнять в свежем материале. Образцы измельчаются с помощью гомогенизатора или терки из нержавеющей стали, обеспечивающих получение однородной массы.
При анализе зерна необходимо соблюдать все требования предъявляемые для подготовки к анализу образцов злаков. Воздушно-сухие образцы должны быть измельчены.
Подготовка к анализу
Тщательно отобранные семена по 215 штук помещают в стеклянные стаканчики. Количество стаканчиков с семенами должно соответствовать числу анализируемых образцов. Предварительно семена отбираются и должна быть определена их всхожесть, которая должна составлять 90 - 95%. Должна быть подготовлена водопроводная вода (прокипеть 10 - 15 мин). После кипения закрыть ватной пробкой и дать остыть.
Ход анализа
Пробу сырого почвенного материала 100 г взвешивают с погрешностью 0,1, пересыпают в колбу 250 см" и приливают 100 CMj водопроводной воды. Взбалтывают в течение 2,5 ч.
Полученную суспензию отфильтровывают и из нее мерной пипеткой отбирают 4 см" раствора, которыми заливают, подготовленные в стаканчиках семена.
Пробу сырого гомогенизированного растительного материала отжимают в марле или белой синтетической ткани и мерной пипеткой отбирают аликвоту 4 см", которой заливают, помещенные в стаканчик семена.
Пробу сухого размолотого растительного материала заливают водой в отношении 2:1, встряхивают в течение 2,5 ч. После чего центрифугируют 30 мин при температуре 00C при 6 тыс./об./мин и из полученной жидкости отбирают 4 CMj, которыми заливают семена биотеста. Через сутки (24 ч) семена раскладываются из стаканчика на чашки Петри. Семена из одного стаканчика точно в количестве 50 штук раскладывают на одну чашку Петри. Таким образом достигается четырехкратная повторность, необходимая для оценки достоверности результатов. Необходимо семена, которые оказались повреждены, оставлять в
321
стаканчике, для этого при замачивании закладывали дополнительное количество семян (15 штук).
Чашки Петри должны быть подготовлены следующим образом: на дно каждой чашки укладывается три бумажных фильтра, соответствующих размерам дна чашки, которые смачиваются 5 см3 водопроводной воды (после кипячения и охлаждения). Поверхность фильтров тщательно выравнивается.
Когда все семена будут перенесены на чашки Петри и равномерно распределены на фильтрах по 50 штук в каждой в 4-кратной повторности для каждого опыта, их необходимо поместить в биотермоста при температуре 25°С на 48 ч.
Через двое суток на третьи (72 ч) замеряют мерной линейкой общую длину проростков на каждой чашке Петри и учитывают количество непроросших семян на каждой чашке.
Расчет суммарной токсичности в исследуемых образцах
Определяют среднюю длину проростка на каждой чашке. Для этого общую длину проростков делят на количество проросших на чашке семян.
Далее определяют среднее арифметическое четырех повторностей по результатам для каждого варианта.
Среднее арифметическое длины проростка, полученное на контрольном варианте (вариант опыта без использования пестицидов) соответствует 100%, а результаты на других вариантах сопоставляются с контролем (в %).
Разность между установленной процентной величиной и контролем и соответствует в случае угнетения определяемой суммарной токсичности.
24. Классификация почв по суммарной токсичности
Класс опасности Характеристика Эффект торможения роста корней 1 Чрезвычайно токсичные > > 75% 2 Высоко токсичные 50 - 75% 3 Умеренно токсичные 20 - 50% 4 Мало токсичные < 20% Посуда
1. Стеклянные колбы объемом 250 см V 4. Чашки Петри.
2. Стеклянные стаканчики (по 75 CMJ). 5. Пластиковый или стеклянный шпатель.
3. Воронки. 6. Мерные пипетки.
322
Материалы, реактивы, аппаратура
1. Семена редиса.
2. Фильтровальная бумага или бумажные фильтры.
