Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка):
Реактивы
1. 0,25 M раствор Na2SO4 (содержит 24,01 мг SO42-B 1 см3).
2. Осадительная смесь BaCl2 + MgCl2.
а) 0,01 M раствор BaCl2: растворяют 2,44 г BaCl2 2H2O в дистиллированной воде, доводят до 1 дм3.
б) 0,01 M раствор MgCl2: 2,03 г MgCl2 6H2O растворяют в дистиллированной воде и доводят до 1 дм3. Оба раствора смешивают в равных объемах.
3. HCl (разбавленная 1:1).
4. 5%-й раствор глюкозы: 5 г глюкозы растворяют в 95 см" дистиллированной воды.
5.10%-й раствор NH4 ОН.
6. Буферная смесь NH4Cl + NH4OH (pH 10): 25 г «х.ч.» NH4Cl растворяют в 100 см3 воды, приливают 200 см" 20%го раствора NH4OH и доводят водой до 1 дм3.
7. Раствор трилона Б 0,01 М, приготовление см. в ПРИЛОЖЕНИИ.
8. Хромоген черный: растирают в ступке 0.25 г хромогена черного с 25 г NaCl. (Установление титра молярного раствора комплексона III см. в разделе «Определение суммы Ca и Mg в почве»).
МпОгредуктаза (восстановленный НАД(Ф): Мп02-оксидоредуктаза. КФ 1.6.99...)
В почве обнаружены дегидрогеназные системы, переносящие водород от окисленных органических соединений к кислороду двуокиси марганца, восстанавливая ее. Реакция протекает в анаэробных условиях. При этом соединения четырехвалентного марганца переходят в двухвалентную форму, доступную для растений, а на кислых почвах в больших количествах - токсичную для них:
MnO2 + 4 H" + 2е ->Мп2'' + 2 H2O. Метод определения Мп02-редуктазы основан на учете количества восстановленной в почве окиси марганца персульфатным способом.
Ход анализа
1 г почвы помещают в пробирку на 50 см". Прибавляют 20 мг тонко измельченного MnO2 и 20 мг CaCO3, тщательно перемешивают. Добавляют 2 см" 1%-го раствора глюкозы, встряхивают.
337
Опытные и контрольные пробирки помещают в анаэростат, закрывают его крышкой, подсоединяют к вакуумному насосу и медленно, в течение 3-5 минут откачивают воздух до разрежения 0,9-1,0 атм. Анаэростат помещают в политермостат на 48 ч при температуре 370C
После инкубации медленно открывают анаэростат. В пробирки добавляют 25 ем" 0,4%-го раствора Na2SO3 в IM растворе CH3GOONH4 и взбалтывают 30 мин для экстрагирования восстановленного марганца.
5 CMj фильтрата переносят в фарфоровую чашку и выпаривают досуха. Сухой остаток обрабатывают 1 CMj концентрированной HNO3 и 2 CMj H2O2 для окисления органического вещества и удаления хлора. Эту обработку повторяют до получения белого осадка, который растворяют в 0,5 см3 концентрированной HNO3. Затем полученный раствор переносят водой в мерные колбы на 100 CMj. К раствору добавляют по 0,5 см3 концентрированных H2SO4 и H3PO4, 1 см" 2%-го раствора AgNO3 и 0,2 CMj персульфата аммония или калия.
Колбу нагревают на электроплитке до появления первого пузырька. Персульфат прибавляют до появления устойчивой розовой окраски. Колбу охлаждают до комнатной температуры, объем раствора доводят до метки водой и колориметрируют, используя зеленый светофильтр и кюветы на 10 мм.
Количество восстановленной двуокиси марганца рассчитывают по предварительно составленному калибровочному графику для стандартных растворов KMnO4.
Активность Мп02-редуктазы выражают в миллиграммах окиси марганца на 10 г почвы за 48 ч.
Реактивы
1. MnO2 (тонко измельченный порошок).
2. CaCO3.
3. 1%-й раствор глюкозы: 1 г глюкозы растворить в 99 CMJ ВОДЫ.
4. 0.4%-й раствор Na2SO3 7 H2O в 1 M растворе CH3COONH4.
5. Концентрированные кислоты (HNO3. H2SO4, H3PO4) и H2O2.
6. 2%-й раствор AgNO3. (NH4)2S203 или K2S2O3.
7. Стандартный раствор: 0,1 M KMnO4 (1 CMj этого раствора содержит 0.11 -мг марганца).
ГИДРОЛАЗЫ
Гидролазы представлены весьма обширной группой ферментов. Наибольшее значение имеют те из них, которые расщепляют сложно-эфирные, глюкозидные, пептидные, кислотно-ангидридные и некоторые другие связи в органических соединениях. Участвуя в реакциях гидролитического распада высокомолекулярных органических соединений, они играют, важную роль в обогащении почвы подвижными и доступными растениям и микроорганизмам питательными веществами.
338
ПЕПТИД-И АМН ДОГИДРОЛАШ В составе растительных остатков и микробных тел в почву поступает значительное количество белковых веществ, аминокислот и других азотсодержащих органических соединений. В превращении этих соединений большую роль играют присутствующие в почве протео-литические и дезаминируюшие ферменты. В результате процессов последовательного протеолэтического расщепления до аминокислот и распада под действием амидогидролаз и дезаминаз с выделением аммиака, азот белковых веществ превращается в доступную для высших растений форму. Это явление известно как процесс аммонификации.
Протеазы (nenmud-гидролазы) (Пептидил-шптидгидролазы. КФ 3.4.4..)
Протеолитические ферменты катализируют гидролитическое расщепление белковых веществ до пептидов и дальнейший гидролиз их до аминокислот. Расщепление белков и пептидов происходит по месту пептидных связей по следующей схеме:
..NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-COOH -> NH2-CH-COOH + . .NH-CH-CO-NH-CH-COOH
При определении активности протеаз в почве в качестве субстрата обычно применяют казеин, желатин и некоторые пептиды.
