Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Минеев В.Г. -> "Практикум по агрохимии - 2-е изд." -> 143

Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.

Минеев В.Г., В.Г.Сычев, O.A. Амельянчик, Т.Н. Болышева, Н.Ф. Гомонова, Е.П. Дурынина, B.C. Егоров, Е.В. Егорова, Н.Л. Едемская, Е.А. Карпова, В.Г. Прижукова Практикум по агрохимии - 2-е изд.: Учебное пособие — M.: Изд-во МГУ, 2001. — 689 c.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка): prak_agrochem.pdf
Предыдущая << 1 .. 137 138 139 140 141 142 < 143 > 144 145 146 147 148 149 .. 299 >> Следующая

Активность пероксидазы (X) выражают в миллиграммах пурпурогаллина
на 100 г почвы за 30 мин: X = ——190-, t
н
где а - мг пурпурогаллина (или бихромата калия) по калибровочному графику; н - навеска почвы, г; 100 - пересчет на 100 г почвы.
Дегидрогеназы (Субстрат: НАД(Ф)-оксидоредуктаза. КФ 1.1.1)
Дегидрогеназы - ферменты, участвующие в процессе дыхания. Они отщепляют водород от окисляемых субстратов. Одни дегидрогеназы могут переносить водород непосредственно на молекулярный кислород, другие - только на какие-либо иные акцепторы, например метиленовую синь. Дегидрогеназы катализируют дегидрирование органических веществ и выполняют роль промежуточных переносчиков водорода. При этом субстратами дегидрирования могут быть различные углеводы, органические кислоты, аминокислоты, гуминовые кислоты и т. д. В почве активно действуют дегидрогеназы углеводов и органических кислот. Отщепляемый в процессе дегидрирования водород может передаваться кислороду воздуха (аэробные дегидрогеназы) или органическим веществам типа хинонов (анаэробные дегидрогеназы). Активность де-гидрогеназ является показателем жизнедеятельности микроорганизмов
330
и количества гумусовых веществ, поддающихся разложению микробами.
При определении активности дегидрогеназ в качестве акцептора водорода применяют соль 2,3,5-трифенилтетразолий хлористый (ТТХ). При этом бесцветные соли тетразолия восстанавливаются в красные соединения трифенилформазана (ТФФ).
Ход анализа
Навеску почвы помещают в вакуумную колбу объемом 50 см3 с притертой стеклянной пробкой. Добавляют 10 мг CaCO3 и тщательно смешивают. Добавляют 1 см3 0,1 M раствора глюкозы и 1 см3 1%-го раствора 2,3,5-трифенилтетразолия хлористого.
Определение проводится в анаэробных условиях. Для этого воздух из колбы удаляют при разрежении 10 -12 мм ртутного столба в течение 2 -3 мин.
Колбу осторожно встряхивают и стдвят в термостат при ?370C на 24 ч. После инкубирования добавляют 23 см3 этилового спирта-ректификата и встряхивают 5 мин. Полученный раствор фильтруют и колори-метрируют в кюветах шириной 5 мм, используя светофильтр с длиной волны 500- 600 нм.
Количество формазана в миллиграммах, соответствующее оптической плотности опытного раствора, рассчитывают по калибровочному графику.
Определение активности дегидрогеназы
Ход анализа
Навеску почвы 1 г помещают в пробирку, добавляют 10 мг CaCO3, тщательно смешивают с почвой встряхиванием. Добавляют 1 см3 0,1 M раствора глюкозы и 1 см3 1%-го раствора 2,3,5-трифенилфосфата хлористого, перемешивают.
Определение проводят в анаэробных условиях. Подготовленные пробирки с образцами почвы помещают в анаэростат, закрывают его и соединяют с вакуумным насосом. Затем медленно удаляют воздух из анаэростата в течение 3-5 мин, достигая разрежения 0,9-1 атм. (что соответствует 10 мм ртутного столба). Анаэростат с находящимися в нем пробирками ставят в политермрстат при температуре 37°С на 24 ч. После инкубирования медленно ослабляют винт крышки анаэростата для постепенного заполнения прибора атмосферным воздухом.
В пробирки с образцами добавляют по 23 см3 этилового спирта-ректификата, встряхивают 5 мин. Полученный раствор фильтруют в мерные колбы на 25 см3. Фильтрат в мерных колбах доводят до метки спиртом-ректификатом, перемешивают и сразу колориметрируют в кюветах на 5 мм, используя светофильтр с длиной волны 500 - 600 нм.
331
Для составления калибровочного графика готовят стандартный раствор формазана в этиловом спирте (0,1 мг в 1 см3), затем в мерную колбу на 25 см3 берут объемы стандартного раствора, содержащие от 0,1 до 1,0 мг формазана, этанолом доводят до метки и фотоколориметрируют.
Активность дегидрогеназы выражается в миллиграммах ТФФ на 10 г почвы за сутки.
Далее определение ведется по вышеописанному способу.
Активность дегидрогеназ (X) рассчитывают по формуле X = а P ' ^
H
где а - мг ТФФ по калибровочному графику; р -разведение; н - навеска почвы, г; 10- пересчет на 10 г почвы.
Реактивы
1. 1 M раствор субстрата дегидрирования: 1 г глюкозы растворяют в 100 см3 дистиллированной воды.
2. 1%-ный раствор TTX: 1 г на 99 см3 дистиллированной воды.
3. ТФФ (трифенилформазан) для калибровочной кривой.
4. Этиловый спирт-ректификат.
Нитратредуктаза (восстановленный НАД: нитрат-оксидоредуктаза. КФ 1.6.6.1)
Процессы восстановления нитратного азота в почве до аммиака катализируют ферменты нитратредуктаза и нитритредуктаза. Нитратредуктаза действует как донор водорода и переносит его к кислороду нитратов. В результате действия нитратредуктазы нитраты превращаются в нитриты: НАД ? H2 + NO3 = НАД + NO2 + H2 О.
Метод определения активности нитратредуктазы в почве основан на учете уменьшения количества нитратного азота при анаэробной инкубации почвы.
Ход анализа
Навеску почвы 1 г помещают в пробирку, добавляют 20 мг CaCO3, в качестве субстрата приливают 1 CMj 1%-го раствора KNO3, тщательно перемешивают. Пипеткой прибавляют 1 см" 1%-го раствора глюкозы в качестве донора водорода, перемешивают.
Пробирки помещают в анаэростат. Воздух из анаэростата медленно откачивают вакуумным насосом при разрежении 0,9-1,0 атм. (10-12 мм рт.ст.). Анаэростат с пробирками помещают в термостат на 24 ч при 37°С.
Предыдущая << 1 .. 137 138 139 140 141 142 < 143 > 144 145 146 147 148 149 .. 299 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed