Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Химия -> Минеев В.Г. -> "Практикум по агрохимии - 2-е изд." -> 149

Практикум по агрохимии - 2-е изд. - Минеев В.Г.

Минеев В.Г., В.Г.Сычев, O.A. Амельянчик, Т.Н. Болышева, Н.Ф. Гомонова, Е.П. Дурынина, B.C. Егоров, Е.В. Егорова, Н.Л. Едемская, Е.А. Карпова, В.Г. Прижукова Практикум по агрохимии - 2-е изд.: Учебное пособие — M.: Изд-во МГУ, 2001. — 689 c.
ISBN 5-211-04265-4
Скачать (прямая ссылка): prak_agrochem.pdf
Предыдущая << 1 .. 143 144 145 146 147 148 < 149 > 150 151 152 153 154 155 .. 299 >> Следующая

Рабочий раствор фосфата получают десятикратным разбавлением стандартного раствора и используют для приготовления шкалы стандартных растворов.
Фосфатазы
(фосфогидролазы моноэфиров ортофосфорной кислоты. Щелочная фосфатаза. КФ 3.1.3.1. Кислая фосфатаза. КФ 3.1.3.2)
Фосфатазы относятся к группе ферментов, катализирующих гидролиз ортофосфорных эфиров различных спиртов и фенолов, фосфор-органических соединений, составляющих от 20 до 80% всех запасов фосфора почвы. Посредством воздействия фосфатаз происходит биохимическая мобилизация органического фосфора, он переводится в доступное для растений состояние. Гидролиз идет по фосфорноэфирным связям с отщеплением остатков ортофосфорной кислоты.
В почве присутствуют кислые (оптимум pH 4,5-5,5) и щелочные (оптимум pH 8,9-9,6) фосфатазы, гидролизующие моноэфиры с образованием минерального фосфора и органического радикала субстрата. В отличие от некоторых других фосфатаз (фосфоамидазы, АТФазы и др.) кислая и щелочная фосфатазы обладают широкой специфичностью.
Методы определения активности почвенных фосфатаз основаны на количественном учете отщепленного при ферментативной реакции неорганического фосфора или органической части молекулы субстрата -фосфорорганического соединения.
Активность щелочной фосфатазы определяют при pH 8 - 9, кислой при pH 5,3 - 5,4; общую фосфатазную активность почвы определяют при естественном pH почвы.
Определение активности фосфатазы
При определении фосфатазной активности в качестве субстрата используют моноэфиры фосфорной кислоты (фенолфталеин-фосфат натрия, ?-глицерофосфат натрия).
Ход анализа
На аналитических весах берут навеску почвы 1 г, переносят в колбу Эрленмейера на 50 см3. Приливают пипеткой 0,9 CMj дистиллированной воды для увлажнения до 90%. Приливают пипеткой 1 см" 1%-го раствора фенолфталеинфосфата натрия, 3 капли толуола, закрывают корковой пробкой и взбалтывают на ротаторе 5 мин.
344
Ставят в термостат на 1 ч при температуре 30°С. Приливают цилиндром 45 см" дистиллированной воды и взбалтывают на ротаторе
5 мин. Фильтруют через беззольный фильтр в мерную колбу на 50 см". 20 см3 фильтрата пипеткой переносят в пробирку, добавляют 2 CMJ 10%-го аммиака, перемешивают.
Окрашенный раствор колориметрируют при зеленом светофильтре в кюветах шириной 5 мм. Количество фенолфталеина, соответствующее взятому объему фильтрата, находят по графику.
Примечание. Если растворы бурые, добавляют в колбу 1 см3 насыщенного раствора алюмокалиевых квасцов.
Активность фосфатазы (X) выражают в миллиграммах P2O5
,лл 1 V (а-6)-р-0,45 -100
на 100 г почвы за 1 час X = —-—?- ,
н
где а - количество фенолфталеина по графику опытного образца, мг;
6 - количество фенолфталеина по графику контрольного образца, мг; н - навеска почвы, г; 100 - пересчет на 100 г почвы; 0,45 - коэффициент перевода фенолфталеинфосфата натрия в P2O5, так как в субстрате одна молекула фенолфталеина связана с двумя молекулами фосфорной кислоты.
Реактивы
1. 1%-й раствор фенолфталеинфосфата натрия.
2. 10%-й водный аммиак.
3. Этиловый спирт-ректификат.
4. Насыщенный раствор алюмокалиевых квасцов.
5. Стандартный раствор фенолфталеина: 0,01 г фенолфталеина растворяют в 60 см3 этилового спирта и объем доводят до 100 см3. 1 см" этого раствора содержит 0,1 мг фенолфталеина. Далее отбирают аликвоты образцового раствора, соответствующие 0,02; 0,04; 0,06; 0,08; 0,1 мг P2O5 в 50 см", окрашивают, как и испытуемые растворы, колориметрируют и строят калибровочный график.
Определение активности фосфатазы с использованием в качестве субстрата ?-глицеррфосфата натрия
Ход аначиза
Навеску почвы 1 г помещают в колбу Эрленмейера на 50 см", приливают 0,9 CMj дистиллированной воды для увлажнения почвы до 90% (при определении активности щелочной и кислой фосфатаз вместо воды приливают такое же количество боратного буфера с pH соответственно 5,3 и 9,0). Затем прибавляют 1 см" раствора, содержащего 5 мг ?-глицерофосфата натрия. Колбы закрывают пробками, взбалтывают 5 мин. на ротаторе и помещают в термостат при температуре 300C на 1 час. После инкубации добавляют 45 см" воды, взбалтывают 5 мин. и фильтруют через беззольный фильтр в мерные колбы на 50- 100 см3.
345
Аликвоту фильтрата помещают в мерную колбу на 50 CMj. Дальнейшее определение содержания P2O5, отщепившегося от субстрата под действием фосфатаз, ведут после окрашивания по Дениже (см. определение активности АТФазы).
Реактивы
1. Раствор ?-глицерофосфата натрия с содержанием 5 мг субстрата в 1 см3.
2. Боратный буфер pH 9,0. Готовят 0,05 M раствор тетрабората натрия следующим образом: 12,404 г сухого реактива H3BO3 (борная кислота) растворяют в 100 см3 0,1 M NaOH и доводят объем до 1 дм3 водой. 85,6 см3 этого раствора в мерной колбе на 100 см" доводят до метки 0,1 M раствором HCl (pH раствора проверить).
3. Боратный буфер с pH 5,3 готовят разбавлением 0,05 M раствора тетрабората натрия 0,1 M раствором HCl до pH 5,3.
Глюкозидгидролазы
Глюкозидгидролазы - большая группа ферментов, катализирующих гидролиз ди-, три- и полисахаридов по глюкозидным связям в их молекулах. Углеводы и близкие к ним вещества содержатся в почвенном органическом веществе, микроорганизмах и растениях в значительном количестве. В почве обнаружены моно-, ди- и полисахариды (целлюлоза, гемицеллюлозы, крахмал и др.), поступающие в почву главным образом в составе растительных остатков, которые могут содержать до 60% углеводов. В биохимическом превращении этих веществ участвует специфический фермент или группа ферментов.
Предыдущая << 1 .. 143 144 145 146 147 148 < 149 > 150 151 152 153 154 155 .. 299 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed