Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
ацетата витамина А, витамина D2, витамина Е, ацетата витамина Е и
витамина А, а также витаминов В2, В12, Кз, С, D2, Е и А (в последнем
случае концентрация
Витамин d2 R = Витамин D3 R =
Превитзмин D
HO'
Люмистерин (9/5,10a) Эргостерин (9a, 10/3)
Рис. 12.3. Структура витамина D и его производных.
Метаболиты витамина D: 25-гидроксийН-
тамин D (25-OH-D);
1.25-днгидрокснвнта* МИН D (1.25-(ОН)2-и);
24.25-дигидроксивн-тамин D (24.25-(ОН)г* D); 25,26-дигндроксн-витамин D
(25,26-(OH)rD); 1,24,25-трИ-гидроксивитамин D (1,24,25-(OH)3-D).
t, мин
Рис. 12.4. Разделение на нормальной фазе синтетической смеси продуктов
фотоизомеризации и продуктов реакции витамина D3 и внутреннего стандарта
(п-диметиламинобензальдегида) [22].
Колонка: 300X4 мм; неподвижная фаза: д-порасил; элюенТ: хлороформ/н-
гексан/тетра" гидрофуран (70 : 30:1): объемная скорость: 1 мл/мин;
температура: комнатная; обнаружение: УФ*Детектор, 254 нм.
1 - транс-D3; 2 - npe-D3; 3 ~ люмистерин; 4 - изотахистерин; 5 -
внутренний стандарт; '6 - тахистернн; 7 -внтамнн D3; 8 - 7-
дегндрохолестернн.
586 Глава 12
Плазма (3-5 мл)+3Н-метаболиты (для определения выхода)
I
Экстракция смесью метанол/метиленхлорид
I
Сефадекс ЬН20+гексан/хлороформ/метанол (90: 10: 10)
______________________________\________________
I I
Фракция 25-OH-D Фракция дигидроксипро-
Фракция витамина D
I
Липидекс 5000, гексан/хлороформ (95 : 5)
\
Зорбакс-SIL (ВЭЖХ на Зорбакс-SIL, гек нормальной фазе), гек-
сан/изопропапол сан/изопропанол (99:1) (96:4)
Липидекс
5000, гексан/хлороформ (90 : 10)
изводных витамина
I
т
Зорбакс-SIL, гексан/изопропанол (90 : 10)
I__________
Зорбакс-ODS (ВЭЖХ на обращенной фазе), метанол/вода (98: 2)
1
Количественное определение витаминов D2 и D3 по УФ-
поглощению
24,25-(ОН)г-D 25,26-(OH)2-D l,25-(OH)2-D
1 i
Количественное определение общего содержания витамина D при помощи метода
конкурентного связывания
Рис. 12.5. Схема многоступенчатого определения метаболитов витамина D
[47].
метанола повышалась со скоростью 3%/мин). Авторы работы [19] определяли
ацетат витамина А, витамин D2 и ацетат витамина Е в таблетках сложного
состава путем хроматографического разделения на обращенной фазе Cis при
элюировании метанолом с 2% воды. Бернс и Маккей [9] сравнили результаты
определения жирорастворимых витаминов в поливитаминных таблетках,
проведенного методами обращенно-фазовой и адсорбционной хроматографии, и
рекомендуют объединять эти два метода для разделения витамина А, ацетата
витамина А, витаминов D2 и Е и ацетата витамина А.
В табл. 12.5 приведены условия разделения методом ВЭЖХ витамина D и
его структурных аналогов, исключая метаболиты витамина D, условия
разделения которых будут приведены ниже.
Витамин D3 гидроксилируется в печени до 25-OH-D3 и в почках до l,25-
(OH)2-'D3 (см. рис. 12.3) и в этой форме включается в механизм кишечного
поглощения кальция и фосфора и в их мобилизацию из костей.
Идентифицирован также ряд других метаболитов витамина D3: 24,25-
(ОН)2-D3) 25,26-(OH)2-D3 и
1,24,25-(OH)3-D3, обладающих меньшей биологической актив-
Таблица 12.5. Примеры разделения при помощи ВЭЖХ соединений группы
витамина D и соединений с близкой структурой
Разделяемые соеди Неподвижная Элюент Применение
Литература
нения а фазаа
D3 н к-Г ексан/изопропанол Кожа крысы
24
(99,5 : 0,5)
D3 н Изооктан/изопропа Ингредиенты пи
25
нол (99,5 : 0,5) --- щи после очист
аналитический ре ки с помощью
жим, хлороформ/ пренаративной
изооктаи/метанол ВЭЖХ
(75 : 25 : 1) --- пре
паративный режим
D3 н к-Гексан/хлороформ Корма
26
(70 : 30)
D2 и D3* О Метанол/Н20 (95 : 5) Стандартные
