Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 242

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 236 237 238 239 240 241 < 242 > 243 244 245 246 247 248 .. 296 >> Следующая

биологической активностью [1]. В отдельных случаях для определения
витаминов прибегают к ГЖХ, однако этот метод не получил широкого
распространения из-за термической нестойкости таких витаминов, как,
например, А и D.
Разделение методом жидкостной хроматографии можно проводить и при
обычной температуре, причем необходимая предварительная очистка образца
весьма проста. В результате колоночная хроматография широко применяется
как метод подготовки проб, а ВЭЖХ с появлением стабильных и эффективных
колонок и чувствительных детекторов стала наиболее быстрым и точным
методом анализа жирорастворимых витаминов, их эфиров, изомеров и других
родственных соединений.
12.1.1. Витамин А (ретинол)
Соединения группы витамина А относятся к каротиноидам и имеют следующую
структуру:
Витамины 57Э
30 -
20
СО
Рис. 12.1. Разделение на обращенной фазе ретинола, токоферола и токола
(внутренний стандарт) экстракта сыворотки крови [10]. Колонка: 250X4,6
мм; неподвижная фаза: RSIL-Cie
(10 мкм); элюент: метанол: объемная скорость:
2 мл/мин; температура: 40 °С; обнаружение: УФ-де-тектор, 292 нм.
+, мин
Важнейшее соединение этой группы ретинол (ЯМакс = 325 нм, 8 = 5200
[2J) участвует в биохимических процессах в спиртовой, альдегидной и
эфирной формах, а также в виде своего производного родопсина (ретиналь,
связанный с опсином через основание Шиффа). Соединения группы витамина А
чувствительны к воздействию света и тепла и легко окисляются, что
затрудняет работу с ними. Подготовку проб к анализу следует проводить
очень тщательно. Поскольку ретинол - наиболее липо-фильный витамин,
мешающие определению липидные материалы необходимо удалить перед анализом
омылением и (или) осаждением. Эти операции, однако, требуют много
времени, или же их необходимо проводить при повышенной температуре.
Вильямс и др. [3] показали, что ГПХ - прекрасный метод определения
ретинола в жире печени трески, делающий ненужной стадию предварительной
химической обработки исследуемой пробы. ГПХ была использована также для
разделения и идентификации метаболитов ретинола в слизистой оболочке
кишок
[4].
При исследовании ретинола используются два следующих подхода (табл.
12.1): осуществляется обнаружение различных соединений группы витамина А
либо одновременное обнаружение смесей витаминов. В первом случае
предпочтение следует
37*
Таблица 12.1. Примеры применения ВЭЖХ для выделения полностью
транс-ретинола
Исследуемые соединения а Неподвижная Элюент Применение
Литература
фаза^
Полностью транс -ретнпол, о Метанол/10 мМ Стандартные
6
13-ч"с-ретинол ацетат нат растворы
рия (80 : 20)
11 -цис-, \3-цис-, 9-цис-Ретто- н 5% диоксана Зрительные
6
лы, полностью гранс-ретннол в н-гексане пигменты
13-г<"с-Ретнноевая кислота, о 1 % ацетата ам Плазма
7
полностью транс-ретинол, мония в сме
полностью тракс-ретннилаце- си НгО/аце-
тат тонитрил
(20 : 80)
Витамины К, D2, Е, А, вита О Н20/метанол Стандартные
3
минов А н Е ацетаты (градиентное растворы
элюирование)
Различные эфнры ретинола о Метанол с Сыворотка
кро 8
различным ви и изучение
содержанием хроматогра
нонов сереб фических
ра проблем
Ретнноевая кислота, ренол, О 10 мМ ацетат Стандартные
4,5
ретинилпальмнтат натрия в сме растворы
си Н20/мета-
нол (20 : 80)
Витаминов А и Е ацетаты, ви О Н20/метанол Поливитамин
9
тамин D2 (1:9) ные таблетки
Пирен (внутренний стандарт), О Н20/метанол Экстракт
вита 3
витамины D2 н А, ацетат ви (градиентное минных кап
тамина Е элюирование) сул
Предыдущая << 1 .. 236 237 238 239 240 241 < 242 > 243 244 245 246 247 248 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed