Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
авторами работы [56], то чувствительность обнаружения флуоресцентным
детектором можно повысить примерно в 10 раз при длине волны возбуждающего
излучения 290 нм.
В соответствии со спектром флуоресцентного возбуждения "-токоферола,
приведенным в работе [57], если использовать для возбуждения длину волны
205 нм, то можно ожидать 20-кратного увеличения чувствительности.
Как следует из данных, приведенных в табл. 12.8, разделение
соединений этой группы осуществляется методами обычной и обращенно-
фазовой хроматографии. Для разделения на отдельные соединения в рамках
именно этой группы более прием-
Таблица 12.8. Примеры разделения токоферолов при помощи ВЭЖХ
Разделяемые соединения Неподвижная фаза
Элюент I Применение Литера
'
тура
ос-, Щ ч-, 6-Токоферолы Силикагель 0,2% изопропанола
или 5% Пищевые продукты, тка 56
диэтилового эфира
в н гек- ни
сане
а-, (5-, •у-Токотриенолы Силикагель 5% диэтилового
эфира в гек- Препаративная ВЭЖХ 56
сане
Витамин А, токол, а-токоферол Обращенная фаза Cis Метанол
Сыворотка 10
а-, Р-, if-, а-Токоферолы, токол Силикагель м-Г
ексан/диизопропиловый Сыворотка 58
эфир (92 : 8)
а-, р-, ^Токоферолы Аминофаза н-
Гексан/изопропанол (98 2) Сыворотка 58
а-, (5-, ^Токоферолы Обращенная фаза Cis Метанол/Н20 (95 :
5) Эритроциты 57
а-Токоферол Обращенная фаза Cis Метанол/Н20 (97:
3) Плазма 59
а-Токоферол Обращенная фаза Cis Метанол
Сыворотка 60
Каротиноиды, витамин К, Силикагель н-Гексан/ди
изопропиловый Плазма 61
к-токэферилацетат эфир (96 : 4)
а-Токоферол Обращенная фаза Cis Метаиол/НгО (95 :
5) Корма 62
7.-Токсферилацетат, витамины Обращенная фаза Cis Метанол/Н20 (9:1)
Поливитаминные таблет 9
А и D2
ки
¦х-Токоферол, а-токоферилаце- Обращенная фаза Cis Н20/метанол
(градиентное Стандартные растворы 3
тат, витамин А, витамина А элюирование)
ацетат, витамины D2 и К
Витамины A, Bi, В[2, Кз, С, D2 Обращенная фаза Cis Н20/метанол
(градиентное Стандартные растворы 11
и Е элюироваиие)
Р-. б-Токоферолы Различные нормальные Различные
Стандартные растворы 63
и обращенные фазы
Витамины 593
Рис. 12.6. Разделение соединений группы витамина Е
[56].
Колонка: 250X3,2 мм; неподвижная фаза: лихросорб SI60
(5 мкм); элюент: 5%-ный дн-
этнловый эфир во влажном гек-саие; объемная скорость:
2 мл/мии: обнаружение: nof
флуоресценции, длина волны возбуждения 290 им, испускания 330 нм.
Т, мин
лема хроматография на нормальных фазах [56], тогда как для отделения а-
токоферола от других соединений этой группы более пригодна обращенно-
фазовая ВЭЖХ, особенно при градиентном элюировании (рис. 12.6).
12.1.4. Витамин К
Витамин К (рис. 12.7) играет важную роль в образовании печенью
протромбина и других белков, принимающих участие в процессах свертывания
крови [64]. Поэтому очевиден возрастающий интерес к изучению метаболизма
и биохимических функций витамина К. К сожалению, проблемы аналитического
определения витамина К, его аналогов и метаболитов рассматриваются всего
в нескольких публикациях.
Природный витамин Ki имеет транс-конфигурацию, тогда как синтетические
продукты содержат цис- и транс-изомеры [65,66], поэтому изучению
биологической активности этих изомеров
38-1489
594 Глава 12
[67-69] или их метаболитов [70] должно предшествовать их препаративное
