Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
27
растворы
D21 D3 О Метанол/Н20 Стандартные
27
(95 : 5) + различ растворы
ные количества нит
рата серебра
npe-D2, тахистерин, н Хлороформ/н-гексанб/ Исходные мате
28
d2 осушенный "-гек- риалы н фарма
сан/ТГФ/уксусная цевтические пре
кислота (60 : 15 . параты
: 25 : 1,5 : 0,4)
транс-D3, пре-Dj, лю- н Хлороформ/"-гексан/ Контроль синтеза
22
мнстеринз, изотахи- ТГФ (70 : 30 : 1)
стеринз, тахисте- н
ринз, D3, 9,7-де-
гндрохолестерин
Пре-02 и пре-Оз*, Петролейный эфир/ Исходные мате 29
люмистеринз, D2 и 1,2-дихлорэтан/ди- риалы и фарма
D3*, тахистеринз, оксан (90 : 8: 2) цевтические пре
npo-D2 и про-бз* параты
D2 и D3*, npe-D2 и н к-Гексан/2-пропанол Рыбные продукты
30
пре-Оз*, npo-D2 и О (96 : 4)
npo-D3* Метанол/Н20 (95 : 5)
Пре-02 и npe-D3*, лю н Петролейный эфир/ Стандартные рас
29
мистеринз, d2, d3* 1,2-дихлорэтан/ТГФ творы
и тахистерин*, про- (85 : 8 : 7)
D2 и npo-D3* О
транс-D3, изотахисте- Ацетоннтрил/пропио- Смоляные масла 31
рин, npe-D3, тахи нитрил/Н20 (79 : и водные дис
стерин, D3, люми 15 : 6) персии
стеринз, 7-дегидро н
холестерин
цис-D3, тахистеринз, Изооктан/этанол Смолы, масла 32
люмистеринз, (99 : 1 : 0,9)
транс-Ds, npe-D3
а Перечислены в порядке их элюирования. Звездочка показывает, что
разделение
проходит неполностью. (r)То же. что н в табл. 12.1. (r) Насыщенный серебром.
587
588 Глава 12
ностью. Их биологическая функция пока недостаточно ясна. Методы
разделения этих метаболитов приведены в обзорах [33- 37]. Пути
метаболизма витаминов D2 и D3 аналогичны. В табл. 12.6 суммированы
данные, характеризующие возможности применения ВЭЖХ для исследований
метаболизма витамина.
Из-за малой стойкости растворов витамина D предварительную обработку
проб следует проводить очень осторожно, чтобы исключить возможность
изомеризации или разложения. Обычно можно ограничиться ополаскиванием
стеклянной посуды различными растворителями, однако в ряде случаев
приходится прибегать к дезактивации поверхности силанизацией. Исследуемые
биологические материалы предварительно фракционируют с тем, чтобы удалить
избыточные побочные продукты, например белки и (или) липиды, а также
повысить концентрацию соединений, представляющих интерес для
исследователя. Обычно вначале проводят экстракцию органическими
растворителями, затем предварительную хроматографическую очистку на
колонках с сефадексом LH20 (см., например, [47, 99, 48]), гидро-
ксиалкоксипропилсефадексом [49], целитом 545 (80%-ный водный метанол -
неподвижная фаза и м-пентан - элюент) или силикагеле при низком (см.,
например, [45]) либо высоком давлении [51, 47]. Один из вариантов такой
очистки показан на рис. 12.5 [47].
Определение в биологическом материале 1,25-(ОН)2-производного витамина
D, обладающего наибольшей биологической активностью, затруднено из-за его
низкой концентрации. Например, концентрация 25-ОН- и 24,25-(ОН)2-
производных (метаболитов) витаминов D2 и D3 в нормальной плазме крови
человека составляет обычно от 1 до 30 мкг/л, тогда как средняя
концентрация l,25-(OH)2-D не превышает 31 нг/л [44]. В связи с тем что в
тех случаях, когда используется спектрофотометрическое обнаружение, масса
биологической пробы ограничена, проблема обнаружения стоит очень остро. В
обычных условиях разделить витамины D2 и D3 не удается ни на нормальной,
