Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
5 - эфнры стеринов; 6 - триглицериды; 7-И, 14, 18, 20, 25, 28 -
ыеидентифицироваиные вещества; /2 - стерины; 13 - свободные жирные
кислоты- 15 - этернфицированные стеринглицери-ды; 19 - цереброзид; /б -
МГДГ; 21 - ФГ; 22 -ДГДГ; 23- ФЭ; 24 - ФИ; 25 - ФЦ; 27 - ФА; 25 - лизо-ФЦ.
ПИД
Рис. 7.12. Разделение метилированных липидов с поверхности волос человека
[3].
Неподвижная фаза: лихросорб $1-60; элюент: от смесн
ССЫнзооктаи (34:66) до смеси хлороформ/диоксан/гексан (40:11:49) н
хлороформ/СНзОН/днизолропиловый эфир (34:36:30); обнаружение: ПИД.
/-холестерин; 2 - воски+эфнры холестерина; 3 - метило* вые эфиры жирных
кислот; 4 - триглицериды; 5 - внутрси*
ний стандарт (моиоолеиидиацетат).
Рис. 7.13а. Разделение триглицеридов кокосового (а), кукурузного (б) н
подсолнечного (в) масел [44].
Колонка: 60 см; неподвижная фаза: |Л-бондапак Си; элюент:
ацетоннтрил/ацетои (2: 1); объемная скорость: 1 мл/мии, детектор:
рефрактометрический.
Рис. 7.136. Зависимость удерживаемого объема от числа атомов углерода и
числа двойных связей [44].
Условия разделения см. в подписи к рис. 7.13а.
26*
3,45 3,40 3,35 (1/T}103
Рис. 7.14. Зависимость коэффициента емкости от обратной температуры
колонки (1/Г), установленная для ряда триглицеридов, содержащихся в
растительных маслах [78}.
Неподвижная фаза: лихросорб RP-18 (5 мкм); элюент;
ацетоиитрил/ТГФ/гексан
(224 ; 123,2 ; 39,6); объемная скорость; 1,5 мл/мин; детектор:
рефрактометрический. Цифры у прямых указывают число атомов углерода
(например, 48) и число двойных связей .(например, :3).
Рис. 7.1S. Хроматограмма выпускаемого промышленностью эмульгатора типа Е
472 [86].
Колонка: 15 см; неподвижная фаза: партисил 5 (5 мкм); элюеит;
гексаи/изопропанол (2% HjO+O.2% НСЮ() (92:8); объемная скорость: 1,5
мл/мнн.
/ - уксусная кислота+ацетилироваиные моиоглицериды; 2 - диацетнлвинный
эфнр диглицерида; 3 - уксусный н диацетилвиниый эфиры моиоглицерндов; 4 -
моноглицернды; 5 - диацетилтартраты; в - ацетилтартраты; 7 - тартраты; 8
- днацетилтартраты; 9 - аце-гнл-+днацетнлвинные эфиры моиоглнцеридов.
Липиды 4С5
емкости и температурой хроматографической колонки (для колонки с
обращенной фазой Cis) при элюировании смесью аце-тонитрил/ТГФ/гексан,
224: 123,2:39,6 (рис. 7.14). Оптимальная температура составляла 14,5°С.
Авторы работы [79] показали, что программируемое повышение температуры в
процессе разделения от 30 до 60 °С улучшает разрешение и форму пиков. В
работе [80] описано разделение смеси природных ТГ из арахисового и
хлопкового масла на колонке с обращенной фазой Cis при элюировании смесью
ацетонитрил/ацетон (42:58). Меченный 14С триглицерид 14С-три-18: 1
элюировался одним пиком с выходом 98%, однако полного разделения на
компоненты в соответствии с числом атомов углерода или двойных связей
достигнуто не было. Анализ жирных кислот во всех выделенных фракциях при
помощи ГХ показал, что только одна из фракций содержит гомогенный три-
18:2, а все другие представляют собой смеси.
Разделение "молекулярных видов" можно проводить и на полярных
неподвижных фазах. Например, на колонке с пораси-лом при элюировании
смесью изооктан/эфир/уксусная кислота (99: 1 : 1) была разделена смесь, в
состав которой входили ТГ с более чем 54 атомами углерода [81].
Обнаружение ТГ, ДГ и МГ в природных смесях при помощи УФ-детекторов
затруднено, так как коэффициенты поглощения (при 213 нм) моно-, ди- и
триглицеридов с насыщенными группами С16 и С18 очень малы -от 63 до 180
см2/моль (разделение осуществлялось на колонке с лихросорбом диолом при
элюировании 95%-ным водным изопропанолом) [82]. Авторы работы [88]
предложили метод получения смешанных хлориод-производных ненасыщенных
групп после разделения, позволяющий проводить обнаружение при 265 нм.
Коэффициент поглощения при указанной длине волны пропорционален числу
двойных связей.
Для обнаружения больших концентраций ТГ используют ИК-детекторы (по
поглощению карбонильных групп при
5,75 мкм).
Рефрактометрические детекторы применялись для обнаружения некоторых
три- и дивернолатов (вернолиевая кислота - цис-12, 13-эпоксиолиевая
кислота), разделенных на колонке с бондапаком при изократическом
элюировании смесью ацетонитрил/вода [85].
Технические эмульгаторы, например эфиры ацетилвинной кислоты и МГ или
ДГ, были разделены [86] на колонке с обращенной фазой Си (рис. 7.15).
Элюентом служила смесь ацетонитрил/гексан/НСЮ4, обнаружение проводилось
при 213 нм. Эмульгаторы типа полиглицеридов были разделены на колонке с
лихросорбом диолом при градиентном элюировании смесью гексан/изопропанол
[87].
406 Глава 7
Таблица 7.5. Содержание полярных липидов в некоторых растительных
J мгдг ДГДГ сл ФХ ФГ
lmpatiens balsamina
зеленый лист 373,0 210,0 23,7 41,1 19,4
стебель 50,0 32,5 2,5 5,3 2,4
корень 20,6 38,6 5,2 16,2 3,1
