Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 160

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 154 155 156 157 158 159 < 160 > 161 162 163 164 165 166 .. 296 >> Следующая

происходящих в растительных и животных организмах. Особенно важны
растительные пигменты, участву-' ющие в фотосинтезе; эти пигменты -
основной объект исследования в физиологии растений. В лаборатории авторов
данной главы [4] разработан простой метод разделения таких пигментов,
осуществляемого за один хроматографический цикл (рис. 7.1 и 7.2).
Наилучшее разделение наблюдается в условиях градиентного элюирования
смесью метанол/вода. Так, в типичном примере элюирование начинают 85%-ным
метанолом и далее в течение 20 мин повышают его концентрацию до 95-98%. В
данном случае метанольный или ацетоновый экстракт растительных липидов
можно наносить на колонку без какой-либо предварительной обработки.
Обнаружение осуществляют УФ-детектором со сменной длиной волны, так как
различные липиды имеют максимумы поглощения при различных длинах волн.
УФ-де-тектор с постоянной длиной волны (254 нм) можно использовать для
обнаружения лишь некоторых хинонов, например пластохинона, а к
каротеноидам, токоферолам и другим липидам он нечувствителен.
Каротеноиды, хлорофилл и пластохинон имеют высокие коэффициенты
поглощения (соответственно 15-104, 8,4-104 и 1,4-104 см2/моль), что
позволяет определять их содержание на уровне 0,7 (каротеноиды) и
Рис. 7.1. Разделение пигментов зеленых листьев ячменя [4].
Неподвижная фаза: лихросорб RP-8, 5 мкм; элюент: метанол (Б)/Н20 от 85 до
95% Б в течение 20 мин, далее 1,5 мин элюирование в изократическом
режиме, после этого в течение 1,5 мин до 98'% Б; объемная скорость: 2,5
мл/мин, температура: 40 °С; обнаружение: УФ-детектор со сменной длиной
волны, программирование длин волн по максимуму поглощения каждого из
разделяемых соединений (Тевнни, неопубликованные данные).
Рис. 7.2. Разделение пигментов гороха, подвергнутого промышленной сушке
(а) и последующему кипячению (б) (Тевини, неопубликованные данные).
Условия разделения см. в подписи к рис.7.1. Начало градиентного
элюирования с 82% Б.
25*
388 Глава 7
t, мин
50
Рис. 7.3. Разделение смеси некоторых природных пренилхи-нонов.
Условия разделения см. подписи к рис. 7.1.
1 - а-токохинои; 2 - а-токоферол; Я - внтамии Ki; 4 - пластогидрохи-
нон-9; 5 - убихинон-9; 6 - пласто-хинон-9; 7 - убихинонЧО.
1,7 нг (хлорофиллы) при 430 нм в обоих случаях. Методом ВЭЖХ с УФ-
детектором с переменной длиной волны возможно обнаружение следующих
количеств пренилфенолов: пластохи-нон (ПХ-9, окисленная форма, при 255
нм) 5,6 нг, витамин Ki (при 265 нм) 4,2 нг, а-токоферол (ос-Т, при 290
нм) 17,5 нг. Однако разделить ксантофиллы лютеин и зеаксантин на этой
колонке невозможно. Поскольку восстановленную форму плас-тохииона ПХ-Нг
не удается отделить от ^-каротина, содержащую их пробу хроматографируют
дважды, причем один раз обнаружение осуществляют при 470 нм ((3-каротин),
второй раз - при 290 нм (ПХ-Н2). Можно также окислить ПХ-Нг до ПХ
хлоридом железа, в этом случае во время второго хроматографического цикла
обнаружение проводят при 255 нм. Пример разделения искусственной смеси
пренилхинонов приведен на рис. 7.3. Ксантофилловые эфиры можно также
разделять при помощи обращенно-фазовой хроматографии на колонке с
неподвижной фазой Сз при градиентном элюировании метаноль-ной смесью (до
100%), рис. 7.4. Время удерживания ксанто-филловых эфиров зависит от
длины цепи и степени насыщенности связанных жирных кислот.
В опадающих осенью желтых листьях содержится значительное количество
лютеиновых эфиров со сложным жирнокислотным составом, разделить которые в
описанных выше условиях не представляется возможным. Жирные кислоты,
входящие в состав ксантофилловых эфиров, оказывают недостаточно сильное
влияние на молярный коэффициент поглощения, чтобы их можно было разделить
в соответствии с содержащимися в них жирокислотными радикалами.
Липиды 389
t, мин
Рис. 7.4. Разделение каротииоидов, входящих в состав желтых (осеиних)
листьев Aesculus hippocastanum L. (Тевини и Ридман, неопубликованные
данные).
Условия разделения см. в подписи к рис. 7.1. Градиентное элюирование
ведется в течение 25 мин от 85 до 100% Б; обнаружение: при 430 нм.
Аналогичные обращенно-фазовые и нормально-фазовые колонки были
использованы рядом авторов для разделения каро-тиноидов и эфиров
хлорофилла высших растений и водорослей [5-11]. Авторы работы [12]
описали разделение хлорофиллов на колонках с обращенной фазой С18 при
элюировании смесью метанол/вода/этилацетат. В табл. 7.2 суммированы
примеры разделения растительных пигментов.
Обращенно-фазовая хроматография пригодна также для разделения
различных токоферолов (а- и б-токоферолов, а- и
б-токотриенолов), входящих в состав растительных масел. Жирорастворимые
витамины впервые были разделены в' 1972 г. [17]; этой же проблеме
посвящен ряд более поздних публикаций [18--21]. Некоторые авторы для
обнаружения токоферолов применяют детекторы по флуоресценции (рис. 7.5),
обладающие большей чувствительностью, чем УФ-детекторы [22-24]. В табл.
Предыдущая << 1 .. 154 155 156 157 158 159 < 160 > 161 162 163 164 165 166 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed