Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка):
210. Stevenson B. R., Goodenough D. A. (1984). J. Cell Biol., 98, 1209.
211. Carlin R. K., Grab D. J., Cohen R. S., Siekevitz P. (1980). J. Cell
Biol., 86, 831.
212. Somerville R. A., Merz P. A.. Carp R. I. (1984). J. Neurochem., 43,
184.
213. Mitchell R. D., Palade P., Fleischer S. (1983). J. Cell Biol.,
96, 1008.
214. Yoshinari M" Taurog A., Krupp P. P. (1985). Endocrinology, 117,
580.
215. Glaumann H., Ahlberg J., Berkenstam A., Henell F. (1986). Exp. Cell
Res., 163, 151.
216. Montague D. J., Peters T. J., Baum H. (1984). Biochim. Biophys.
Acta, 77, 9.
217. Burnette B" Batra P. P. (1985). Anal. Biochem., 145, 80.
218. Batra S.'(1982). Acta Physiol. Scand.. 114, 91.
219. Warley A" Cook G. M. IF. (1976). Biochem. J., 156. 245.
220. Hutton J. C" Penn E. 1Peshavaria M. (1982). Diabetologia, 23,
365.
221. Cameron R. S.. Castle J. D. (1984). J. Membr. Biol., 79, 127.
222. Fricker L. D., Snyder S. N. (1982). Proc. Natl. Acad. Sci. USA,
79,
3886.
223. Fishman J. B., Fine R. E. (1987). Cell, 48, 157.
224. Willems M. F., De-Potter W. P. (1983). J. Neurochem., 41, 466.
225. Gordon-Weeks P. R., Lockerbie R. O. (1984). Neuroscience, 13, 119.
226. Hook G. E. R., Gilmore L. B. (1982). J. Biol. Chem., 257, 9211.
227. Gonatas J. O., Gonatas N. K., Stieber A., Fleischer B. (1985) J
Neurochem , 45, 497.
ГЛАВА 2
МЕМБРАННЫЕ ФРАКЦИИ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК
Д. Джеймс Моррё, Эндрю О'Брайтман, Анна Стина Санделиус
1. Введение
В этой главе представлен обзор методов выделения мембран растительных
клеток и обсуждены возникающие при этом проблемы. Получение изолированных
мембран имеет решающее значение для создания бесклеточных систем, без
которых немыслим прогресс в исследовании сложных физиологических и
биохимических феноменов [1].
Особое внимание уделено новым разработкам, в первую очередь выделению
плазматических мембран с помощью распределения в двухфазной системе, а
также выделению плазматических мембран и тонопластов из одного гомогената
методом препаративного электрофореза в свободном потоке. Объем данных о
ферментах-маркерах и критериях для оценки чистоты полученных фракций
постоянно возрастает; составлены таблицы распределения активностей и
описаны маркеры для различных мембранных фракций. В настоящее время
уровень развития экспериментальных подходов к выделению очищенных
мембранных фракций из растений близок к тому, что был достигнут ранее
только для печени крысы [2].
Различия во фракционировании мембран растительных и животных клеток
обусловлены тремя факторами.
1. Растительная клетка окружена целлюлозной оболочкой (стенкой). Эта
стенка в принципе не создает особых помех при выделении мембран, но ее
наличие совершенно необходимо учитывать при разработке методов
гомогенизации растительных тканей или клеток растений в культуре. Способы
гомогенизации должны быть, с одной стороны, достаточно жесткими, чтобы
разрушить клеточную стенку, а с другой - достаточно мягкими, чтобы не
повредить органеллы.
2. В центре большинства клеток растений находится крупная заполненная
жидкостью вакуоль, ограниченная мембраной - тонопластом. Ее площадь
примерно такая же, как и площадь плазматической мембраны. При разрушении
вакуоли образуются маленькие везикулы, а основная масса вакуолярного
Мембранные фракции растительных клеток
63
содержимого выходит в среду, в которой осуществляется гомогенизация; при
этом происходит разбавление среды и снижение pH (если среда недостаточно
забуферена). Часто в вакуолях содержатся таннины в высокой концентрации
или другие вторичные продукты, которые могут отрицательно влиять на белки
и активность ферментов.
3. Пластиды образуют систему органелл, по объему равную или
превосходящую митохондриальную. В зеленых тканях пластиды (хлоропласты)
содержат хлорофилл. Пластиды незеленых частей растений (например, корней)
хлорофилла не содержат, но сами они присутствуют в таких тканях в
значительных количествах. В их состав может входить крахмал; это так
называемые крахмальные пластиды, или амилопласты. Именно они ответственны
за образование объемного крахмального осадка при центрифугировании
гомогенатов корней или запасающих тканей.
Излюбленным источником материала для разнообразных экспериментов по
изучению роста являются так называемые этиолированные растения, т. е.
растения, выращенные полностью или частично в темноте. Пластиды
(этиопласты), полученные из этиолированных растений, могут содержать
крахмал и различные протилакоидные мембраны. Предшественники любого типа
пластид на ранних стадиях развития обычно называются пропластидами или
препластидами. До сих пор не было обнаружено активно развивающихся тканей
высших растений или водорослей, не содержащих пластид. Их присутствие
затрудняет фракционирование растительных тканей в неменьшей (а возможно,
и в большей) степени, чем присутствие митохондрий. Пластиды легко
подвергаются фрагментации, а седиментацион-ные свойства или плавучая
плотность этих фрагментов отличаются от аналогичных характеристик
